细胞如何解冻才能不被破坏？？？

1. 解冻需要快速，细胞从-80℃冰箱或者液氮罐中取出以后迅速放到水浴箱，
2. 水浴箱需要先均匀加热到37℃，
3. 按照冻存液的多少，解冻时间控制在1-2分钟，
4. 解冻过程缓慢晃动冻存管，使受热均匀

快速解冻深低温保存的细胞，然后直接将其接种到生长培养基中，如果细胞对抗冻剂（DMSO或甘油）特别敏感，则离心除去抗冻剂，然后将细胞接种到生长培养基中。

1. 从液氮罐拿出来后，可快速放入37℃恒温水浴锅化冻；
2. 若无水浴锅条件，可双手快速搓热，化冻。

直接接种法

1．从冻存管中取出细胞，用37℃水浴快速解冻。

2．将细胞直接接种到完全生长培养基中。每毫升冻存细胞需要10-20ml完全生长培养基。计算活细胞的个数。细胞接种量至少要达到3X105 活细胞/ml。

3．将细胞培养12-24h。更换新鲜完全生长培养基以去除抗冻剂。

离心法

1．从冻存管中取出细胞，用37℃水浴快速解冻。

2．将1-2ml 冻存细胞接种到大约25ml完全生长培养基中。要非常轻柔地进行混合。

3．用大约80 X g的速度离心2-3分钟。

4．吸除上清液。

5．用完全生长培养基轻轻重悬解离下来的细胞，并计算活细胞的个数。

6．接种细胞。细胞接种量至少要达到3X105 活细胞/ml。

快快快，一定要快，建议37℃温水快速解冻十几秒到几十秒就够了！

按下面方法进行操作:

1.快速解冻。冻存细胞从液氮中取出后，应立即放入 37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在 1 分钟内全部融化（不要超过 3 分钟）。

2.解冻操作过程动作要轻。由于冷冻保存过的细胞变得非常脆弱，不仅解冻速度要快，而且动作要轻。一般情况下，解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养（1ml 冻存细胞液加入到 25－30ml 新鲜完全培养液中），24 小时后再用新鲜完全培养替换旧培养液，以去除 DMSO。如果，细胞对冷冻保护剂特别敏感，那么，解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。

3.解冻时务必注意安全，预防冷冻管爆裂，要带手套，用镊子将细胞冷冻管从液氮中取出，放入 37℃水浴中。切不可直接用手，以免冻伤。

4.冷冻管在水浴中解冻时，要将冻存管盖子拧紧，确定拧紧后再投入水浴锅中，注意液面不可超过冻存管盖面，否则，易发生污染。

细胞要迅速解冻，拿出来放37°水浴锅摇晃解冻

在解冻细胞时要注意快速解冻，防止冰晶损伤细胞，可以将细胞在37℃解冻，培养基也在37℃温育，避免损失细胞，同时要注意无菌操作，可用75％酒精喷拭，减少污染

复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

冷冻细胞需要以缓慢而可控的速率进行，但是将冷冻的细胞解冻时最好采用较快的速度。细胞周围冰晶的消失不会产生与冰晶形成相同的破坏效应，因此最好尽快使细胞恢复到正常培养条件，使用水浴解冻，37度适宜，切不能将细胞暴露高于37度之下，条件允许可以恒温箱解冻，但均需要注意防止污染。

有以下几个建议：

1.快速解冻：在水浴中迅速解冻细胞，然后尽快将其置于培养条件中。解冻过程中，冻存管中应该还有一小块冰​。

2.限制DMSO接触时间：虽然大多数细胞对二甲基亚砜（DMSO）并不敏感，但是过长的接触时间可能会对细胞产生不利影响，因此建议尽快稀释掉DMSO​。

3.根据细胞类型调整程序：例如，某些干细胞对DMSO非常敏感，可能需要在解冻后离心以去除所有的DMSO​。

4.更换培养基：解冻后的第二天，建议更换培养基以去除大部分的DMSO，并移除没有附着的细胞（如果细胞是贴壁的）。

细胞解冻最重要的还是要快，负八十或者液氮拿出来就放到37度水浴箱复温，然后及时处理，否则就容易破坏的。

不断的摇动，使管中的液体迅速融化，

注意管口处高于水面，以免进入导致污染。

整个解冻过程最好在 1 分钟以内，以防融化过程中产生大量冰晶损伤细胞，

取出用酒精喷拭冻存管的外壁，立即拿入超净台内。

细胞解冻主打一个快 从液氮中取出细胞后快速移至37度水浴箱 要水中晃动冻存管 注意观察 剩余少量细胞还处于冻存状态即可 然后用酒精棉球擦拭冻存管 移至无菌操作台中将细胞和37度水浴的培养液 移至培养瓶或培养皿中即可

38度水浴解冻，然后使用5~6倍体积的培养液稀释冻存细胞，离心收集细胞，使用新鲜培养液重悬，培养即可减少细胞破坏

迅速溶解，加入培养液后快速混匀

总的原则是快解冻，从液氮取出后立刻放入提前加热的水浴锅中，待溶解后将细胞液转移到10ml左右的pbs中然后离心，再去上清，加培养基重悬。