为什么BV2细胞总是极化？

梧桐疏雨OBDU

2023-05-24

BV2细胞去年10月购自北京协和医学院基础所，到达后按说明书处置，传代两次后冻存。
冻存液：90%澳洲胎牛血清+10%DMSO。经4℃半小时、-20℃两小时、-80℃一周，梯度降温存放至液氮中。
今年3月需要使用BV2细胞进行实验，遂复苏。复苏方法：将快速水浴融化的细胞悬液加入培养皿（Corning，100mm）中，加完全培养基至10ml，置培养箱中培养4小时，换液。
复苏后细胞状态尚可，增殖速度快。约1.5-2天传代一次，1传4-6，消化时间约室温1.5min
但培养3-4代后，NO水平升高，镜下细胞出现“长角”现象，重复尝试未发现原因。更换可稳定培养RAW264.7细胞的操作者可将其出现时间轻微延后（约1-2代）
血清均GIBCO，由南美胎牛换为北美胎牛效果不大
培养基：DMEM高糖（GIBCO）+10%血清
胰酶：GIBCO，0.05%（说明书建议）
求教各位大佬，还有其他方法可以减少极化激活吗？
另外小老师操作时使用同一胰酶，但表示消化困难，需消化3min，仍然较难吹打下。我只需要消化1.5-2min，可很顺利吹打下来，甚至感觉消化时间略长