THP1如何敲除基因？

可以按照以下步骤进行：

1. 设计目标基因敲除的CRISPR/Cas9方案：确定你要敲除的基因，并设计CRISPR引导RNA（sgRNA）序列，用来帮助Cas9酶在特定位点切割目标基因。

2. 验证和合成sgRNA：合成设计好的sgRNA序列，并检验它在体外是否能够成功引导Cas9切割目标基因。这样可以确保sgRNA能够准确地与目标基因配对。

3. 构建载体：制作CRISPR/Cas9载体，一般是将sgRNA序列克隆到Cas9表达载体中。这样就能确保构建好的载体能够有效表达Cas9酶和sgRNA。

4. 转染细胞：将制作好的CRISPR/Cas9载体导入THP-1细胞中。可以使用不同的方法来实现转染，比如电击法、化学转染或病毒载体转染。选择适用于THP-1细胞且能够高效转染外源DNA的方法。

5. 选择和克隆：转染后，使用适当的筛选条件（例如，抗生素抗性基因）来选择和扩增具有目标基因敲除的细胞亚群。可以使用限制稀释法或细胞分选技术（如流式细胞术或限制性稀释法）进行单细胞克隆。

6. 验证敲除的细胞克隆：使用PCR、Western blot、免疫组化或其他适当的分子生物学方法来验证敲除细胞克隆中目标基因的敲除效果。

THP1 最好用电转，用病毒都不一定能进去。敲完以后，用流式做单细胞打板就可以。

先构建慢病毒载体感染后用抗生素筛选