细胞转染效率低，鱼类细胞转染效率更低，怎么解决？

1. 转染效率与质粒质量相关:质粒需要无肉毒素，否则影响细胞生长。
2. 转染时细胞状态要好，密度处于50%左右为佳。
3. 转染时，需要用无血清培基稀释质粒和转染试剂，以防血清影响转染效率

1．选择合适的转染试剂

不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。

2．保持最佳的细胞状态

一般低的细胞代数（<50）能确保基因型不变。最适合转染的细胞是经过几次传代后达到指数生长期的细胞，细胞生长旺盛，最容易转染。细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。也就是说同一种系的细胞株，在各实验室不同培养条件下，其生物学性状发生不同程度的改变，导致其转染特性也发生变化。因此，如果发现转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复最佳结果。

3．选择高效的转染方法

不同转染试剂有不同的转染方法，但大多大同小异。转染时应跟据具体转染试剂推荐的方法，但也要注意，因不同实验室培养的细胞性质不同，质粒定量差异，操作手法上的差异等，其转染效果可能不同，应根据实验室的具体条件来确定最佳转染条件。

4．确保所构建载体的质量。

转染载体的构建（病毒载体，质粒DNA，RNA，PCR产物，寡核苷酸等）也影响转染结果。病毒载体对特定宿主细胞感染效率较高，但不同病毒载体有其特定的宿主，有的还要求特定的细胞周期，如逆转录病毒需侵染分裂期的宿主细胞，此外还需考虑一些安全问题（如基因污染）。除载体构建外，载体的形态及大小对转染效率也有不同的影响，如前面提到的超螺旋及线性DNA对瞬时和稳定转染的影响。如果基因产物对细胞有毒性作用，转染也很难进行，因此选择组成或可调控，强度合适的启动子也很重要，同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。

转染率低可以从以下几点考虑:

1.有血清时的转染

只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，在转染过程中可以使用血清的。

转染过程在两步中需要使用培养基做为稀释液：在DNA-阳离子脂质体复合物准备过程以及复合物同细胞接触过程。

大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康。对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用一些营养丰富的无血清培养基，或者在转染培养基中使用血清。

对于对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用LIPOFECTAMINE 2000。

2 培养基中的抗生素

抗生素，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。在转染培养基中不能使用抗生素，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。这样，在转染前也不必润洗细胞。

对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外，为了保证无血清培养基中细胞的健康生长，使用比含血清培养基更少的抗生素量。

3 细胞状态

原代细胞和传代次数多的细胞都不是最佳选择，处于对数生长期的细胞生长状态最好，最适合转染。

细胞的密度不宜过大，转染后的细胞密度更加重要。选择50%~80%区间密度进行细胞转染。

4.细胞铺板密度 贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2×106-4×106细胞/ml时效果较好。

5 .启动子的选择。

保证质粒纯度，无内毒素，然后采用优质的转染试剂

以下是几个可能有助于提高转染效率的建议：

1.使用更适合的转染试剂。不同的细胞可能需要不同的转染试剂，因此不存在"最好的试剂"。在一些实验中，转染试剂TransIT-LT1、JetPEI、GenePorter-3000、Fugene-6的效率相对较高​。

2.转染的时机可能也会影响效率。有些细胞系可能在接种前一天转染效果较好，而有些细胞系可能在悬浮状态下转染效果更好​。

3.转染时所用的质粒大小和基因大小可能也会影响转染效率。大质粒和大基因的转染效率可能会有显著的下降，可能需要使用比正常更高的浓度（比如25-50倍）的质粒来获得合理的表达细胞数量​。

有没有试试用电转的方法啊，电转效率比较高，就是损失的细胞也会比较高。

建议优化细胞密度：合适的细胞密度可以提高细胞转染的效率。通常建议在细胞扩增到对数生长期时进行转染。

转染效率低的原因可从以下几方面找：

1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。

2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。

3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策：用好的质粒纯化试剂确保质粒DNA质量，正确保存，确保质粒DNA不被降解。

4.转染试剂选择不当。建议选用效率高，毒性低的转染试剂，比如engreen的Entranster试剂。

5.细胞密度不是最优，优化细胞密度。

6.混和加入细胞中不含血清。在转染过程中使用含有血清的培养基，细胞状态良好有利于转染效率的提高。

7 .转染体系中含有抑制物 转染体系中不应包含EDTA、柠檬酸、磷酸盐、RPMI、硫酸软骨素、透明质酸酶、硫酸葡萄糖聚酶及硫酸化蛋白聚糖

8.检验转染效率及表达的方法有问题 使用报告基因来检测转染效率，报告基因使你确定目标基因的表达

9.启动子及增强子不被包装细胞识别。确认你构建质粒上的启动子增强子与靶细胞相容。

10.转染试剂保存不正确，转染试剂保存在4℃。

可以尝试优化转染条件，我们做脂质体转染的时候，在开展正式实验前要多做预试验，优化转染条件。优化转染条件包括：脂质体的用量、DNA密度、细胞密度、脂质体和DNA混合孵育时间等等。