细胞提取蛋白的方法？

先加裂解液，裂解完以后再刮取细胞到ep管里面，这样更科学

1.根据实验需要取出需要提取的细胞培养板，置于冰上，用吸引器吸除上清液。PS：所有操作均应在在冰上进行。

2.每孔细胞（六孔板）中加入 1-2ml 4℃预冷的PBS溶液。平放轻轻摇动十秒钟清洗细胞，然后吸除洗液，共清洗洗细胞三次（目的是去除剩余的上清液），最后一次不吸除上清液。

3. 用刮勺将细胞轻轻刮下，接着用移液器将细胞和上清液转移至1.5ml离心管中，置入4度离心机（提前开离心机预冷），离心1.5min，弃去上清液。

4.配置裂解液（所用裂解液为RIPA裂解液，可以使蛋白得到充分释放），每 1ml 裂解液加 10 μl PMSF（100mM），摇匀置于冰上。（PMSF 要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合）。PS：PMSF属于蛋白酶抑制剂，可以减少蛋白质的讲解，另外的蛋白酶抑制剂还可以用cocktail，NaF，NaN3等，也可以同时加入多种蛋白酶抑制剂。

5.将配置好的裂解液加入第3步获得的细胞沉淀中，一般undefined10^6个细胞加入100ul的裂解液，然后吹打重悬，使细胞充分裂解。

6.用超声仪进一步裂解细胞：将细胞放置于冰上进行超声，一般功率选择为15%左右，裂解时间为1分钟（超声2s，休息4s），当超声一次后，离心管仍比较浑浊，可以间隔几分钟再次超声。

7.超声结束后，将细胞于4度离心机，12000rpm离心 25min。

8.将离心后的上清分装转移至1.5ml 离心管，保存于－80℃备用。

建议先把细胞刮下来收集到ep管中再加裂解液。

可以直接加裂解液进去细胞中，裂解的时候刮下来到ep管中

在提取细胞蛋白前，用pbs将培养基清洗干净，然后可以直接加裂解液在6孔板中，要注意在冰上进行操作

两种方法都可以用于蛋白提取，但选择哪种方法可以根据您的实验需求和个人偏好来决定。

如果您选择将裂解液直接加到6孔板或培养皿中：

• 确保裂解液能够均匀覆盖到细胞的表面，以确保充分的细胞裂解和蛋白释放。

• 使用足够的裂解液量，以确保液体覆盖整个细胞层。

• 轻轻摇晃6孔板或培养皿，以帮助促进裂解液与细胞的接触和混合。

如果您选择先将细胞刮下来收集到EP管中再加入裂解液：

• 使用细胞刮片或细胞刮剂将细胞从培养皿或6孔板上刮下，尽量收集所有的细胞。

• 将细胞收集到预冷的EP管中。

• 加入足够的裂解液量以覆盖细胞，并确保裂解液与细胞均匀混合。

• 利用离心机离心EP管，以帮助裂解液和细胞的混合。

无论您选择哪种方法，都需要注意以下事项：

• 使用适当的裂解液，可以根据实验需求选择含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的裂解液。

• 按照蛋白提取方法的要求和步骤进行，例如冷冻-解冻周期、振荡或离心等步骤。

把裂解液加到板里效果好一些，细胞裂解不会浪费

应先用裂解液，裂解时间到后，使用细胞刮刀刮下细胞。

直接将裂解液加入到6孔板中提取总蛋白

我们实验室是刮下来再加裂解液。