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科研学霸天团，48小时有问必答
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做免疫荧光时用到的免疫电镜的相关问题？
asswei
是为了更好地观测到DNA分子的超微结构。
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问
请问诱导用的IL-4是人源的还是鼠源的？
huarenqiang5
诱导用的IL-4人源和鼠源的都可以。自己可以根据实验目的和要求进行选择。
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问
免疫荧光实验问题求助？
huarenqiang5
你的这个情况建议最好还是重新做为好。
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问
求助免疫荧光实验的问题？
心细北方
用PBS多洗几遍应该好一些，楼主可以试试！
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问
请教病人组织蜡块切片后存放在条件
申东熙老伯
切片最好放在四度冰箱，两三个月应该是没问题的。
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问
免疫组化的问题求助？
asswei
DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就被覆盖，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗 体孵育时间；此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间。
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问
BM–DC好难诱导条件摸了无数次
asswei
有许多方法可进行。Lutz法与Son法相似，均可大量制备BMDC。Lutz法与Inaba经典方法和Son法的最大不同是使用细菌培养皿（Petri dish）而非细胞培养板来培养骨髓细胞。Ⅰnaba法是细菌培养皿不容易使骨髓中的巨噬 细胞贴壁，从而抑制巨噬细胞的发育，进而避免巨噬细胞对DC成熟的抑制作用， 这可能是该法能够以较低铺板密度获得大量 BMDC 的主要原因。但该法的培养时间较长，需要10-
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问
如何分离外周血NK细胞和单核细胞
毛利小五郎的徒弟
目前主要的分离方法是Ficoll-hypaque（葡聚糖－泛影葡胺）密度梯度离心法，因为血液中各有形成分的比重存在差异最多12天，但需要刺激。
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问
做免疫荧光的玻片怎么处理才比较好呢？为什么放入玻片爬片后就染菌了呢？
申东熙老伯
可以用免洗的细胞爬片做免疫荧光，如果不是免洗的玻片可以在使用之前用镊子夹着过一遍火。
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问
磁珠分选和流式分选中对细胞的处理过程有什么不同？
毛利小五郎的徒弟
流式分选需要先制备单细胞悬液，然后染色才能进行分选
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问
FIIC标记的抗原如何用于抗体的流式分选？
毛利小五郎的徒弟
可以通过做同型对照，然后间接标记法进行FIIC抗原的流式分选
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问
流式分选抗体IgG和IgM，用来结合人PBMC中的B细胞，一般用鼠抗人抗体吗？
huarenqiang5
是的，流式分选抗体IgG和IgM，结合人PBMC中的B细胞一般用鼠抗人抗体。
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问
豚鼠皮肤免疫组化，为什么会出现黑渣子
huarenqiang5
考虑存在支原体或其他细菌污染了，建议及时处理。
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问
为什么视野中细胞与细胞之间存在散在的发光点？
毛利小五郎的徒弟
那是非特异性结合产生的背景荧光。属于干扰
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问
求大神看看这是怎么回事呢？
balalaLy
这是冰冻切片没有处理好出现的组织破碎了
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问
为什么磁珠优先吸附大片段而不是小片段？为什么磁珠表面带负电还可以吸附DNA？
huarenqiang5
磁珠会优先吸附大片段DNA，是因为在一定浓度的PEG和盐离子体系中，片段更长的DNA会因失水暴露更多的磷酸基团，然后在盐离子如钠离子的作用下，优先与磁珠结合，而更小的DNA片段则不结合。
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问
相同粒径的磁珠，是否提取DNA的能力就一样了？
huarenqiang5
相同粒径的磁珠提取DNA的能力不相同。
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问
封片的时候是周边点上封片液，还是点到中间，永久封片怎么弄？
huarenqiang5
封片的时候只需要在中间点封片液。 永久装片的封片方法，包括以下步骤： 1.封片胶包裹标本：将标本置于封片胶中，使标本与封片胶充分接触，在封片胶中缓慢拖动标本至标本周围无小气泡为止，取出标本，得到包裹有封片胶的标本；将包裹有封片胶的标本转移至盖玻片上，得到带有标本的盖玻片； 2.载玻片滴封片胶：在载玻片上滴加封片胶，得到带有封片胶的载玻
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问
免疫原性细胞死亡标志物HMGB1检测
asswei
可能存在有样品纯度低或操作时失误等情况。
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问
求助最近要做细胞免疫荧光
毛利小五郎的徒弟
如何可以使用质粒转染或者也可以进行胞吞入核，比较难，需要多练习
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