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科研学霸天团,48小时有问必答
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求助丨文献中右上角带有三角的图例看不懂
于小鱼鱼1998
cre和yfp都是起标志作用的
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问
肌管免疫荧光染色怎么选MYHC抗体?
loveliufudan
选择MYHC抗体可以参考以下原则:1. 如果要识别I型慢肌管,使用抗MYH7的抗体(P12883)。2. 如果要识别IIA型速肌管,使用抗MYH2的抗体(Q9UKX2)。 3. 如果要识别IIB型速肌管,使用抗MYH4的抗体(Q96233)。4. 如果要识别IIX型速肌管,使用抗MYH1的抗体(P12882)。5. 如果要识别心肌细胞,使用抗MYH6的抗体(P13533)。6. 如果要识别冬眠期或
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问
共培养T细胞分泌干扰素和颗粒酶B的计算
毛利小五郎的徒弟
可以设置两组干扰素与颗粒酶的单组对照,然后用共同组与单组进行比值,之后对比结果来看哪一种影响大一些
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问
Chip 实验中,为什么input没有条带?ip跑出来位点不同?
小小小小小芳
如果input没有结果,先检查样本本身是否可信,PCR反应条件/体系是否正确;然后才能进一步分析
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问
细胞免疫荧光和WB结果相反这是什么原因
balalaLy
细胞实验的话应该是一致才对的,可能是实验操作误差,比如荧光拍摄参数是否一致
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问
请问各位有没有试过拍完免疫荧光,随后把细胞吹下来去跑流式的?
毛利小五郎的徒弟
不可以再用胰酶消化了,因为固定后细胞都已经死掉了
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问
免疫荧光,包被明胶1h后铺细胞,做的过程细胞还是容易脱落怎么解决
麻黄连翘赤小豆
加2%硫酸铬钾,形成铬酸明胶,浸泡1-2小时再铺细胞就不会脱落了
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问
冻在液氮里的组织怎么研磨提蛋白啊,用什么工具
balalaLy
大块的组织可以用研钵研磨,小的组织可以用1.5ml ep tube有配套的研磨棒研磨
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问
ELISA实验中空白孔无颜色变化,而阴性对照、样本孔及阳性对照组都要颜色,后面验证时发现不加抗
loveliufudan
可能原因有:1. 一抗质量问题。没有经过阴性对照阻断的一抗本身就与其它成分非特异性结合,出现假阳性。2. 洗涤不充分。操作过程中各孔间交叉污染,导致空白孔被污染。3. 孵育条件不佳。温度或时间不当,导致非特异性结合增加。4. 试剂配置问题。如浓缩抗体未稀释至适宜工作浓度。5. 样本中存在干扰因素。样本本身与检测试剂非特异性结合。
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问
请问大家,抗体的互补决定区与抗原决定簇是如何决定抗原-抗体结合特异性的?
loveliufudan
抗体与抗原的特异性结合是通过抗体的互补决定区(CDR)与抗原的抗原决定簇(epitope)之间的互补性实现的。抗原决定簇是抗原分子表面特异性三维结构,是抗体识别的位点。抗体分子通过其互补决定区与抗原决定簇进行高度互补的空间结合,就像钥匙与锁孔的契合。互补决定区一般由6个CDR组成,3个在轻链(CDR-L1,CDR-L2,CDR-L3),3个在重链(CDR-H1,CDR-H2,CDR-H3)。这6个
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问
为什么石蜡切片在展片的时候组织总是展不平?
小小小小小芳
要注意石蜡切片是否完全干燥,否则展开时会出现不均匀的情况;同时,在制作展片板时,要将切片放置在正中央,并避免空气泡的存在,石蜡切片的厚度影响展片效果、温度和湿度都有影响
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问
检测某种抗原特异性T细胞用什么方法比较好啊?酶联免疫斑点试验还是MHC四聚体技术还是细胞内胞内细胞因子染色法啊
loveliufudan
对于检测抗原特异性T细胞,常用的主要方法有:1. 酶联免疫斑点试验(ELISPOT):通过分泌细胞因子形成的斑点数量,反映抗原特异性T细胞的数量。操作简便,灵敏度高,定量结果好。适合检测少量样本。但无法分析细胞亚群。2. MHC四聚体/二聚体技术:通过特异性MHC-多肽复合物识别抗原特异性T细胞。可以结合其他抗体明确细胞亚群。但需要知道特异性肽序列,操作较复杂。3. 细胞因子染色:活化后检测细胞内
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问
请问影响蛋⽩质谱鉴定成功与否有哪些因素?
loveliufudan
影响蛋白质谱鉴定成功与否的主要因素包括:1. 样本准备:样本的提取、处理、解蛋白是否标准化,杂质是否充分去除,会影响后续鉴定效果。2. 色谱分离:是否获得良好的色谱图,峰形是否对称分离清晰,分辨率是否足够。这决定了质谱的质量。 3. 质谱采集参数:扫描范围,碎裂能量,采集时间等参数设置是否优化,直接影响获得的质谱图质量。4. 数据库搜索:选择合适的数据库,设置正确的搜素参数,会影响结果的可靠性。
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问
iTRAQ/TMT和Label-free技术都有哪些优缺点?
loveliufudan
iTRAQ/TMT和Label-free都是蛋白质组学研究中常用的定量技术,它们各有优缺点:iTRAQ/TMT的优点:1. 可以在同一实验中标记和定量多个样本,提高实验效率。2. 标记后样本混合检测,有利于减少技术误差。3. 标记反应简便,易于操作。4. 标记覆盖面广,可以定量绝大部分肽段。iTRAQ/TMT的缺点:1. 需要额外的标记实验步骤,增加实验复杂度。2. 标记试剂价格较高,会增加实验成
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问
细胞免疫化学染色步骤有哪些?
loveliufudan
细胞免疫化学染色的主要步骤包括:1. 细胞爬片制备:将细胞铺展在玻片上,可以制成悬液滴片或细胞爬片。2. 固定:使用甲醛或乙醇等固定液固定细胞,保持细胞形态和目标抗原。3. 渗透处理:使用 Triton X-100 等渗透剂增加细胞膜通透性,让抗体进入细胞。4. 封闭:使用牛血清等封闭液,封闭非特异性抗原结合位点。5. 一抗孵育:加入特异性一抗,与目标抗原特异性结合。6. 二抗孵育:加入标记的二抗
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请问BDNF与IBA-1荧光共定位做不出来的原因是什么?
汤姆卜丽波
有可能是你的两个二抗会互相反应,或者IBA-1本身二抗特异性不高,可以换一个
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问
请问BDNF与IBA-1荧光共定位做不出来的原因是什么?
huarenqiang5
主要考虑是二者的二抗选择不合理导致。建议重新选择二抗试试。
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问
ELISA测抗体效价阴性空OD值过高,抗体稀释25600倍之前阴性孔和阳性孔OD值均为2左右
汤姆卜丽波
我之前做ELISA也有这种情况,基本都是洗板子的时候污染了阴性或者空白对照孔,你调整一下流程再试试看
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问
文章缺乏新意,选题困难
huarenqiang5
选题的几点建议: 1、紧跟时代步伐进行选题。 2、根据发展阶段进行选题。 3、多范围内进行选题。
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问
如何选择合适的咋推
毛利小五郎的徒弟
是想问如何选择合适的杂志吗?具体一下问题,可以帮你解决
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