ELISA测抗体效价阴性空OD值过高，抗体稀释25600倍之前阴性孔和阳性孔OD值均为2左右

我之前做ELISA也有这种情况，基本都是洗板子的时候污染了阴性或者空白对照孔，你调整一下流程再试试看

考虑以下几点原因及建议:

1 试剂盒组分被污染。建议使用新的试剂盒，按照说明书要求保存试剂盒。

2. 试剂配制不正确 。 建议按照试剂盒说明书步骤，配制相应的试剂溶液。

3. 吸液或加液不正确。 建议检测移液器和吸头，使用校准好的移液器和正确的移液方法。

4. 混用其他试剂盒试剂。 建议使用试剂盒内完整的一套试剂进行实验，不同品牌及不同批次间的试剂可能存在不匹配现象。

5. 洗涤次数不够。 建议按照说明书的洗涤次数进行操作。

6. 孵育温度不正确。 建议按照说明书提供的孵育温度进行孵育。

7. 孵育时未覆膜，导致溶液挥发污染。 建议加封口膜，或者加盖进行孵育。

8. 显色时间过长。 建议根据实际显色情况酌情缩短或延长，一般为15分钟左右，但不可超过30分钟。

9. 酶标仪设置错误。 建议在酶标仪上检查波长和滤光片设置。

1.试剂盒未回温（对应解决方法：试剂盒回温到25℃）；

2.温度控制不好（对应解决方法：控制正确温度）；

3.孵育时间不准确（对应解决方法：控制孵育时间）；

ELISA测定抗体效价时,阴性空白对照OD值过高会影响效价的准确性和精确度。根据您描述的情况,有以下几个可能的原因:

1. 基质溶液未处理好或质量差。基质溶液中的双重抗体或底物会非特异性结合,导致高背景。可以换一个新的基质试剂盒试试。

2. 微量板本身有问题。微量板中的一些亲和力高的结合位点会非特异性吸附抗体或基质,产生高背景。可以用新的微量板重复实验。

3. 仪器测量参数设置不当。如果增益设置过高会造成高背景值。应降低增益,或者减小孔径来减少这种影响。

4. 洗涤过程不够。如果洗涤强度或次数不足,会残留过多的非特异性结合物质在孔中,导致高背景。应增加洗涤次数或使用更强的洗涤液进行重洗。

5. 试剂污染。如果试剂在配制和使用过程中受到污染,也会产生高背景。应严格控制试剂的质量。

建议您从以上几点着手检查和改进,重新设计实验,选用清洁的新试剂和新微量板进行实验,并且注意孔径设置、洗涤条件和仪器参数的优化,这些措施应能有效降低背景,提高效价测定的准确性。