ELISA实验中空白孔无颜色变化，而阴性对照、样本孔及阳性对照组都要颜色，后面验证时发现不加抗

可能原因有:

1. 一抗质量问题。没有经过阴性对照阻断的一抗本身就与其它成分非特异性结合,出现假阳性。

2. 洗涤不充分。操作过程中各孔间交叉污染,导致空白孔被污染。

3. 孵育条件不佳。温度或时间不当,导致非特异性结合增加。

4. 试剂配置问题。如浓缩抗体未稀释至适宜工作浓度。

5. 样本中存在干扰因素。样本本身与检测试剂非特异性结合。

1可能原因：洗板不干净；解决方法：充分洗涤，彻底拍干；洗板要防止交叉污染；浓缩洗液准确配制；吸嘴尽可能一次性使用；加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。

2)可能原因：显色液变质或者试剂过期；

解决方法：检查试剂盒有效期。

4)可能原因：试剂稀释有误，如加酶的浓度过高；

解决方法：请按说明书所示稀释倍数配制；

5)可能原因：蒸馏水受酶等污染；

解决方法：使用新鲜蒸馏水；

6可能原因：试剂混用；

解决方法：不同批号试剂勿混用。

7)可能原因：培养箱温度超过37℃或反应时间过长。

解决方法：显色反应时间适当缩短

ELISA操作过程中导致空白对照孔显色加深的主要原因是

洗涤不彻底

包被原，包被液有没有问题，有没有配错

问题出现在加抗原之前，可以看有没有杂质和目的蛋白混合，可以进行纯化，纯化后再做

先排除阴性对照孔是否存在污染，首先考虑阴性对照存在污染所以阴性存在颜色