ELISA 实验 FAQs 之试剂盒、样本

本文主要介绍 ELISA 试剂盒、实验样本、相关问题，帮助大家更好地开展实验

试剂盒

Q1：科研试剂盒与临床试剂盒的区别 ？

A1：临床试剂是经过权威机构认可的，如 FDA、CFDA 等；而科研试剂一般是厂家自主研制，不需要通过权威机构验证。

经营临床诊断类产品的机构需要取得《医疗器械经营企业许可证》；经营科研试剂的机构不需要此证件。

临床试剂盒一般仅用于检测人血清/血浆等较为单一的分泌性样本类型；科研试剂盒的样本检测种类、检测范围则比临床试剂盒宽广得多。但一般来说，临床试剂盒的质量、稳定性等性能会优于科研试剂盒。

Q2：试剂盒能否分次使用？没有用完的试剂组分如何存放？

A2：试剂盒可以分次使用。我们的酶标板条是可拆卸的，您可以根据实验需求，确定每次实验所需的酶标板条数量及各试剂组分含量。

溶解后的标准品，建议以最高浓度/母液，分装保存于 -20℃ 条件下，避免反复冻融，半个月内使用有效。

生物素化抗体工作液及 HRP 酶结合物工作液需现配现用。未用完的浓缩液及其他组分，需要按照说明书要求，分别及时地保存于 2~8℃/-20℃ 条件下，一般可存放 6 个月。

样本

Q1：高脂实验样本该如何处理？

A1：高脂实验样本含有脂肪，不是均质溶液，若直接上样，会影响抗原抗体的结合，导致测值不准确。建议先大转速（5000×g）离心，静置 10min 后，取中层较澄清液体，再用大转速（≥5000×g）离心一次，取中下层清液，用于检测。

Q2：实验样本稀释方案是怎样的？

A2：试剂盒检测范围不等同于实验样本中待测物的浓度范围。实验前，建议通过相关文献预估实验样本中待测物的浓度，并通过预实验确定实验样本的实际浓度情况。

如果您的检测样本需要稀释，参考稀释方案如下：

稀释 100 倍：一步稀释。取 5μL 样本到 495μL 标准品 & 样本稀释液内，做 100 倍稀释；

稀释 1000 倍：两步稀释。取 5μL 样本到 95μL 标准品 & 样本稀释液内，做 20 倍稀释，再取 5μL 20 倍稀释样本到 245μL 标准品&样本稀释液内，做 50 倍稀释，总共稀释 1000 倍；

稀释100000倍：三步稀释。取 5μL 样本到 195 μL标准品&样本稀释液内，做 40 倍稀释，再取 5μL 40 倍稀释样本到245μL 标准品&样本稀释液内，做 50 倍稀释，最后取 5μL 2000 倍稀释样本到 245μL 标准品&样本稀释液内，做 50 倍稀释，总共稀释 100000 倍；

每步稀释时，取液量不少于 3μL，稀释倍数不超过 100 倍。每步稀释都需混合均匀。

Q3：大小鼠采血容量？

A3：根据实验方案所需采血量的要求，我们可以选择不同的采血方式。

鼠尾采血法：

取血量较少时，采用此方法。通常选择剪断尾巴进行采血。亦可不剪尾，用 7-8 号注射针头刺入尾静脉采血。

小鼠每次可取血 0.1mL，大鼠每次可取血 0.2~0.4mL，可多次反复采血。

眼眶静脉丛采血法：

取血量中等时，采用此方法。持玻璃毛细管，从眼内眦部以 45° 刺入眼眶静脉丛，进行采血。

小鼠每次可取血 0.2~0.3mL，大鼠每次可取血 0.4~0.6mL，可多次反复采血。

断头采血法：

取血量较多时，采用此方法。无需麻醉动物，快速剪掉头颈部，倒立动物，让血液自由滴入容器。

小鼠可取血 0.8~1.2mL，大鼠可取血 3.0~8.0mL，此方法为致死性采血。