冻在液氮里的组织怎么研磨提蛋白啊，用什么工具

大块的组织可以用研钵研磨，小的组织可以用1.5ml ep tube有配套的研磨棒研磨

操作方法：

1：首先用研钵在低温液氮下进行预冷工作。

2：将组织放入研钵内，每次加入15ml的液氮，将组织敲碎，用棒研钵至粉末为止。

研磨要在液氮环境下操作，一定要控制在零下197℃的原因：

1：RNA容易降解，低温可以防止研磨产生热降解RNA。

2：植物细胞在低温环境下细胞壁会变得脆弱，便于细胞破碎，释放RNA。

一般来说，冻存在液氮中的组织可以使用机械破碎法或化学法等方法进行蛋白提取。

机械破碎法是将组织样品在液氮中研磨成细粉末，然后加入蛋白质提取缓冲液进行破碎。常用的机械破碎方法有：

1. 手持式研钵：将组织样品放入手持式研钵中，使用研钵棒在液氮中轻轻研磨，然后加入蛋白质提取缓冲液进行破碎。

2. 球磨机：将组织样品和研磨珠放入球磨机中，使用球磨机进行研磨。

3. 超声波破碎器：将组织样品放入超声波破碎器中，使用超声波进行破碎。

化学法是利用化学试剂破坏细胞膜和细胞核，使蛋白质从细胞内溶解出来。常用的化学法有：

1. 酸性提取法：将组织样品加入酸性缓冲液中，在冰上搅拌破碎，然后离心沉淀，收集上清液即可。

2. 碱性提取法：将组织样品加入碱性缓冲液中，在冰上搅拌破碎，然后离心沉淀，收集上清液即可。

需要注意的是，在进行蛋白提取时，需要避免蛋白质的降解和氧化，因此最好在低温下进行，并添加蛋白酶抑制剂等保护剂。另外，选择合适的破碎方法和破碎时间也是影响蛋白提取效果的重要因素。

将冻在液氮中的组织研磨以提取蛋白质是常见的实验步骤。为了研磨组织，你可以使用震荡器（homogenizer）或者研钵和研棒。以下是两种常见的方法：

1. 震荡器法：将被冻结的组织放入冷却的震荡器管中，加入研磨珠或研磨球，并加入一定量的研磨缓冲液（如RIPA缓冲液）。然后，将震荡器置于冰上，以保持低温，并使用合适的震动速度和时间进行震荡，直到组织充分破碎为止。

2. 研钵和研棒法：在液氮中冷冻后，将组织放入预冷的研钵中。然后，使用预冷的研棒迅速研磨组织，直到达到所需的颗粒度和破碎程度。在这个过程中，保持砧板、研棒和研钵的低温非常重要。

在这两种方法中，都要确保保持低温，以防止样品在研磨过程中过度融化。此外，可以根据具体研究目的选择合适的缓冲液或溶液以提取蛋白质。记得在操作前做好个人防护，戴手套、护目镜等，确保实验安全。

研钵和研杵：将冻在液氮里的组织取出，放入研钵中，加入适量的研磨缓冲液（例如含有盐和缓冲剂的 PBS 或 Tris-HCl 缓冲液），然后使用研杵将组织研磨成细胞碎片。

超声波破碎器：超声波破碎器可以将样本通过高频率的超声波震荡和剪切破碎成细胞碎片。

A:将组织块在液氮里冻实，敲成大小合适的小块后放在研钵里，倒液氮，边研边加，保持研钵里有液氮，或是保持组织块不融。研碎了就行了。注意做前研钵等器具要预冷，用液氮或是先放负二-冰箱一段时间。

注意事项:1.液氮研磨的研钵，药勺必须预冷。2.开始研磨前，将研钵置于冰袋上，并加入少量的液氮，快速将样品转入其中。3.继续加入液氮，快速捣碎样品，然后快速研磨。4.待液氮挥发完前，继续加入液氮，快速淹没，重复操作，待样品变成非常细小的白色干粉时即可。5.将千粉刮下转入裂解液中，再加裂解液于研钵中，将其中的黏附的样品洗下。整个过程保持样品处干温度低的环境，研磨的速而有力度。这样才能破碎细胞，同个降解蛋白。

1：首先用研钵在低温液氮下进行预冷工作。

2：将组织放入研钵内，每次加入15ml的液氮，将组织敲碎，用棒研钵至粉末为止。

研磨要在液氮环境下操作，一定要控制在零下197℃的原因：

1：RNA容易降解，低温可以防止研磨产生热降解RNA。

2：植物细胞在低温环境下细胞壁会变得脆弱，便于细胞破碎，释放RNA。

步骤如下:

1.取米粒大小组织，放入研钵中，加入液氮研磨(反复加液氮研磨)。

2.研磨充分后加入RIPA裂解液(RIPA中裂解液与蛋白酶抑制剂PMSF比例为100:1)。

3.继续研磨至裂解液化为液体后，吸出裂解液放入1.5ml离心管中，裂解15一30min。

4.4℃离心，15000rcf，10min。

5.留上清，测蛋白浓度。

6.其余蛋白中加6xbuffer，100ul液体中加20ul6xbuffer，终浓度为1xbuffer。

7.-20℃保存 。