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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
蛋白组学如何快速建立方法?如果给第三方公司做,成本很高。但是自己做建立方法又很难很慢,如何解决这两者之间的矛盾?
huarenqiang5
你可以先借鉴一下这篇文章,《蛋白质组学研究的基本步骤》。然后决定是给第三方公司做还是自己建立。
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问
电泳时样品没有溢出到其他泳道,胶进行考马斯亮蓝染色后,各个泳道蛋白都连在一起了,而且泳道越来越宽,为什么呢?
balalaLy
上样量太大了,蛋白向两边溢了。
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问
请问诸位老师,定量蛋白质组学的抗病毒天然免疫通路蛋白泛素化研究,最近有什么新的学科进展?谢谢
huarenqiang5
研究新进展,可以看一下这篇文章《Tankyrases inhibit innate antiviral response by PARylating VISA/MAVS and priming it for RNF146-mediated ubiquitination and degradation》,该研究使用生化纯化方法,首次发现VISA能够被Tankyrase 1 (TNKS1,PARP5a
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问
大肠杆菌中菌上清液中高效液相色谱测天冬酰胺的含量
sswei
1). 先对流动相进行过滤,根据需要选择不同的滤膜,般为有机系和水系,常用的孔径为0.20um和0.45um。2). 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3). 正常情况下,仪器先用甲醇冲洗10-20分钟,然后再进入测试用流动相(如流动相为缓冲试剂,则要次重蒸水冲洗10-20分钟,直至色谱柱中有机相冲净为止) 。4). 般情况下,流动相冲洗20-30分钟后,仪器方可稳定,重要的是仪器基线走
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问
跑SASPAGE胶,发现条带比预测大小大20kDa,目的条带10kda
静心观照
1.确定蛋白是内源的还是外源的,如果是外源蛋白是不是全长序列;2.SWISSPROT 数据库查询该蛋白是否有其他isoform ;3.SWISSPROT 和文献查询蛋白质是否有剪切活化,剪切活化造成蛋白变小;4.确定蛋白质是否是二聚体或多聚体5.NCBI和SWISSPROT 查询蛋白质表达后是否有修饰,如有修饰会导致蛋白质增大如果除了上述 5条,还是没找到问题在哪里,那就回过头看看是不是预测不准或
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问
做wb蛋白组学分析,大家对于相同kd是直接洗脱后重敷显影还是另外做多一条?有方案的大神可以分享一下
静心观照
相同KD的蛋白,如果完全重合做好多做一条或重新跑。当然,也可以洗脱一下重新孵育新的抗体,后者可能会出现前一个抗体没有洗掉,或者连同蛋白完全洗掉的情况。
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问
自制ELISA板测定的数据前两行异常高
毛利小五郎的徒弟
这种情况最可能的原因就是有杂质蛋白污染,建议先排除污染
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问
scfv在膜上不表达
高山云初
无义序列一般不会,影响的因素有几点:1、翻译起始位点现在大部分的表达载体都提供起始位点,所以它已经把起始密码子与核糖体结合位点的距离进行了优化,一般情况下不需要自己再添加,不过还是要留意载体图谱上是否注明有起始密码子和终止密码子。2、GC含量表达序列中的GC含量超过70%的时候可能会降低蛋白在大肠杆菌中的表达水平。3、mRNA二级结构在起始密码子附近的mRNA二级结构可能会抑制翻译的起始或者造成翻
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问
羊抗鼠血清制备
高山云初
抗血清的制备程序免疫原的配制1、福氏不完全佐剂( Ferund ' S adjuvant , imcomplete , FIA )100克石腊油与50克羊毛脂置于盐水瓶中充分涡旋混匀,过滤除菌或高压灭菌(10P15分钟),置4℃存放备用。(有市售产品, Sigma )2、福氏完全佐剂( Ferund ' S adjuvant , compelete , FCA )取干粉卡介苗25-250mg于10
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问
噬菌体展示做ELISA结果有疑问,求求救命
huarenqiang5
你的这个情况建议首先排除细菌或支原体污染。
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问
是loading buffer出了问题还是胶出了问题?
dxy_kqm3zpd0
感觉是有漏液,导致两边电流不稳定
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问
ELISA检测困惑
周末也要努力呀
都是相对而言的,与自己的空白组相比看处理组的变化。变化倍数保持一致就可以
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问
纯化了一个病毒蛋白,免疫小鼠,3免后间接ELisa测血清效价,拿了同学的免其他病毒蛋白的血清,发现包被我的蛋白,孵他的血清,阳性,
小小小小小芳
不知道你所谓的高是相对什么而言的高,阴性一般是相对数值,选用的波长和抗体的滴度都可能使数值偏高,关键是看你的阳性和阴性的比值是怎么样的,一般要大于2.1才算是正常的阳性。
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问
agrin蛋白转膜的条件是啥啊?试了很多条件都不行
毛利小五郎的徒弟
转膜条件80v,30min就可以将蛋白转印,最多不超过60min,只要marker成功转移到膜上,相应的分子量就转移过去了。
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问
全血放置在4度冰箱里两天还能分离出血清嘛?
sswei
如没有发生溶血的话,放几天应该能看到血清自己析出来。直接离心应该没问题的。
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问
WB转膜液中Tris的作用是什么呢
于小鱼鱼1998
tris能提供碱性环境,然后提供一个缓冲作用
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问
WB中转膜液为什么要添加甲醇呢,其作用又是什么
于小鱼鱼1998
PVDF膜一定要在纯甲醇里浸润的!不然蛋白结合不上去。在100%甲醇里短暂浸润,其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团,使它更容易跟带负电的蛋白质结合。小分子及大分子量的蛋白转移时,多加或不加甲醇也是这个目的
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问
请问巯基乙醇为什么可以破坏二硫键,其作用机制是怎么样的?
Keven轩
巯基乙醇具有还原性,可以还原二硫键
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问
SDS-PAGE需要使用蛋白抗体吗?
sswei
SDS—PAGE需要使用蛋白抗体
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问
免疫印迹法和 Western blot具体有什么区别?是同一种吗?
小小翻车鱼
免疫印迹法和Western blot是两种不同的实验方法,尽管它们都是基于免疫学原理的蛋白检测技术。尽管两者有很多相似之处,但它们的操作步骤和侧重点有所不同。1. Western blot:Western blot是一种用于检测蛋白质表达和定量的实验方法。它的基本原理是通过电泳(如SDS-PAGE)分离蛋白质样品,然后将分离的蛋白质转移至硝酸纤维素膜或其他支持物上。接着,通过使用针对特定抗原的特异
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