大肠杆菌中菌上清液中高效液相色谱测天冬酰胺的含量

1)． 先对流动相进行过滤，根据需要选择不同的滤膜，般为有机系和水系，常用的孔径为0.20um和0.45um。

2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

3)． 正常情况下，仪器先用甲醇冲洗10-20分钟，然后再进入测试用流动相(如流动相为缓冲试剂，则要次重蒸水冲洗10-20分钟，直至色谱柱中有机相冲净为止) 。

4)． 般情况下，流动相冲洗20-30分钟后，仪器方可稳定，重要的是仪器基线走后，方可进样测试。

5)． 同时进两针标样，将其结果相比较，其结果的比值在0.98-1.02之间后，就可以正式进行样品的测试了。

6)． 样品测试结束后，就要进行色谱仪及色谱柱的清洗和维护。如流动相为缓冲试剂，同样也要用重蒸水清洗10-20分钟，方可用有机相进行保护，否则，有损色谱柱。

7)． 关机时，先关计算机，再关液相色谱。

方法参数设定：

1、波长设定：

检测器显示初始屏幕，在波长处于闪烁状态下，输入所需波长值，按 [Enter]键确认。

2、灵敏度设定：

按[func]键，灵敏度设定处于闪烁状态，用数字输入所需灵敏度值，按[Enter]键确认。

3、流速设定

泵显示初始屏幕，流速设定处于闪烁状态，用数字输入所需的流速（脱气时流速一般设为5.0ml/min，做样时流速一般设为1.0ml/min），按[Enter]键确认。

使用操作：

1、更换流动相：

（1）将滤头放入流动相中；

（2）打开泵的放空阀，流速设定处于闪烁状态，用数字输入所需流速（一般设为5.0ml/min），按[pump]键冲洗大约30s-1min左右，待气泡赶尽，再按[pump]键停止冲洗，关闭放空阀；

（3）先用10%甲醇或乙腈水溶液用0.8-1.0ml/min流速冲洗色谱系统30min；（4）按[func]键，选定流速1.0ml/min，按[pump]键，冲洗柱子大约20-30min 左右。

2、进样

（1）进样前按检测器[zero]键调零；（2）用待进溶液清洗注射器，按质量标准要求抽取待进溶液适量（取样量一般为所用定量环的5倍以上，保证进样量大于定量环）并排除气泡后进样；如不能随时更换定量环时则需精密量取后进样。

（3）击Run Single图标，键入方法名，文件名，保存途径。将进样针的样品溶液针头垂直朝上，用手指轻弹其外壁，将针内气泡赶出，进样阀在进样状态(INJECT)将微量进样器水平插入进样阀的导针孔，然后将进样阀手柄转到取样状态(LOAD)，匀速平推注入样品，将进样阀手柄果断转到进样状态(INJECT)。软件上按“启动”。拔出微量进样器。记录图谱；

（4）待样品检测完成后，先关闭检测器（D灯），更换流动相为10%甲醇或乙腈水溶液，冲洗色谱系统至少30min（如含盐或强酸或碱，至少冲洗60min）。再次更换流动相为纯甲醇冲洗系统30min左右以维护系统的清洁。

（5）关闭工作站、电脑，检测器及泵的电源。