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跑SASPAGE胶,发现条带比预测大小大20kDa,目的条带10kda

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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dxy_iebbil42


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5 个回答

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静心观照

有帮助

1.确定蛋白是内源的还是外源的,如果是外源蛋白是不是全长序列;

2.SWISSPROT 数据库查询该蛋白是否有其他isoform ;

3.SWISSPROT 和文献查询蛋白质是否有剪切活化,剪切活化造成蛋白变小;

4.确定蛋白质是否是二聚体或多聚体

5.NCBI和SWISSPROT 查询蛋白质表达后是否有修饰,如有修饰会导致蛋白质增大

如果除了上述 5条,还是没找到问题在哪里,那就回过头看看是不是预测不准或者实验出错了。

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dxy_iebbil42user-title

我用的pGEX载体,载体26kda,目的基因10kda,有没有可能是因为终止子的原因,如果是整体都表达出来,对研究蛋白的功能会有影响吗


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feixue7758527w

有帮助

那就要看看纯化的时候是不是有问题,要测一下提取蛋白的纯度。也有可能是marker有问题,不过这个可能性不大。

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周末也要努力呀

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可能存在的这种情况。一来你可以看一下别人跑的多少,二参考说明书观察条带在多少,三整张膜只有这一条带。这种情况可以使用

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此用户已注销

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有可能是蛋白有修饰现象;还有可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应

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sswei

有帮助

1、免疫球蛋白可能过度表达,导致分子量大于正常。

2、免疫球蛋白可能有多个亚基结构,导致分子量偏大。

3、免疫球蛋白的抗原可能太小,导致分子量偏大。sdspage是聚丙烯酰胺凝胶电泳,PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术,用于分离蛋白质和寡核苷酸。

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