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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
已经逆转录之后的cdna,化冻以后上样扩增之前可以涡旋吗?
cq2019
cDNA还是比较稳定,可以瞬时涡旋震荡的
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问
扩增厚的产物在电泳时有时没有条带或者有的很浅怎么破啊?
bamboopiggy
可能是你的pcr程序不合适,实在不行,先做个touch down吧,然后再扩增
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问
pcr操作过程怎么能避免各种酶的污染呢?特别容易被污染
bamboopiggy
pcr过程中的污染,主要是气溶胶,dna的污染,注意规范操作
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问
请问细胞基因测序得结果准确吗?为什么我跑出来pcr验证结果确是相反的?
bamboopiggy
seq的结果,不同公司分析的都会不一样,所以仅供参考,还是需要qpcr验证一下
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问
设计引物,普通PCR条带弱,QPCR出现双峰是什么原因?
bamboopiggy
说明设计的引物不特异。有非特异性结合
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问
PCR琼脂糖凝胶电泳,如何能跑一条干净的条带?
bamboopiggy
模板杂质少,琼脂糖凝胶融的好,引物特异。
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问
PCR如何减少二聚体及非特异性产物?
Eason老歌迷
你可以从下面几个原因里找出对策:重新设计你的引物;也有可能模板有问题;你的模板浓度过小,适当加大模板量;你的Taq酶,引物,Mg2+浓度可能过高;取你所要加的上下游引物混合后,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟,然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却,这时再加入反应体系当中,引物二聚体就会消失的;若降低退火温度,发现还是只有引物二聚体,而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别,则考虑Buffer
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问
PCR实验过程中产物在凝胶上呈Smear状态拖尾怎么办
丁香木木
提高退火温度、重新设计引物、提高特异性
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问
PCR实验过程中无扩增产物什么情况
bamboopiggy
可能模板没加,酶坏了,仪器坏了,你阳性对照出来么?
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问
PCR实验过程中模板处理方法不完善怎么办
秋秋欣欣
PCR实验模板先从提RNA开始,然后逆转录得到模板cDNA,进行一定的稀释就可以用于PCR
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问
PCR实验过程中采样污染怎么办
天一湖医者
使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度;
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问
PCR实验过程中假阳性扩增怎么办
汤姆卜丽波
假阳性一般是交叉污染,加样过程中或者存储过程中混淆了,操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外;所有器材均应高压消毒。所用离心管及加样枪头等均应一次性使用。各种试剂分装准备
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问
PCR实验过程中被污染怎么办?
whilt-shirt
这种情况你可以重新跑一块板子试试
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问
在进行等位基因特异性 PCR实验 中,设计的引物与等位基因匹配后,电泳分析后得到的阳性产物不多是什么原因?
天一湖医者
可能是pcr条件不行,还有多种原因的,比如酶,浓度,多试几次就好了
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问
当多种病原微生物混合在一起时,用PCR反应管可同时检出多种病原微生物,怎样分解出特定的病原微生物?
bamboopiggy
你都混在一起了,是不是想说怎么分解出特定的pcr产物?这个你可以根据你的目的,设计特定的primer来进行pcr
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问
从琼脂糖凝胶中纯化 PCR 片段时,缺口的DNA 有点多,已经减少对凝肢的照射时间了,还有别的办法能增加成功的DNA环吗?
bamboopiggy
你是说你pcr 的DNA胶回收以后,DNA突变多么?可以考虑是不是模板的问题。
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问
PCR 请问各位学术高手
dxy_g9y5gije
你先尝试一下逐渐放大根据你的条件,我觉得可能是50体系引物太少或者酶太少,导致产物含量少,所以感觉没有PCR出来,实际上是有产物的
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问
求助贴 科研小白进入瓶颈期
灵枢天问
你要不要考虑换个抗体试试😂 ,或者在组织里试一下
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问
PCR的酶如何选择,冰箱里有Taq酶,primerstar酶,还有高保真酶,有的产物是平末端,有的带A,这是怎么回事啊?
dxy_jrj59zn3
看你的PCR实验要求,如果要求准确度高的话,就用高保真酶,primerstar应该也是高保真酶的一种吧,比如说你后续要测序,然后构表达载体,就最好是有准确度高一点的PCR产物。
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问
荧光定量PCR时应该注意什么?
Eason老歌迷
它的关键步骤在于RNA的抽提和引物的设计。RNA的抽提需要严格进行RNase free的操作,抽提的RNA OD260/OD280需严格控制在1.9-2.1之间。引物设计主要的考虑是其PCR反应特异性好和扩增效率高,进行PCR反应时无非特异性的条带和引物聚合体出现,尽量选取GC含量在40-60%的区段进行扩增。另外,还需要适应荧光定量PCR仪上机条件的设定,退火温度在55-65℃之间。除此之外,其
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