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PCR如何减少二聚体及非特异性产物?

相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

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里哩犀浦

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4 个回答

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whilt-shirt

有帮助

纯化模板,优化反应体系和程序。

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bamboopiggy

有帮助

注意annealing temperature,以及引物设计时,看一下评分

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Eason老歌迷

有帮助

你可以从下面几个原因里找出对策:重新设计你的引物;也有可能模板有问题;你的模板浓度过小,适当加大模板量;你的Taq酶,引物,Mg2+浓度可能过高;取你所要加的上下游引物混合后,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟,然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却,这时再加入反应体系当中,引物二聚体就会消失的;若降低退火温度,发现还是只有引物二聚体,而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别,则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀,导致吸取的试剂浓度不对;可以提高引物与模板的特异性,减少引物二聚体。

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汤姆卜丽波

有帮助

提高引物特异性,pcr循环也不能太多

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