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科研学霸天团,48小时有问必答
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各位有见过 lnc与蛋白同名的吗
汤姆卜丽波
一般不会同名,这种情况可能就是公司说的那个原因
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问
4kb载体与3kb片段连接一直不长菌落
bamboopiggy
你热激后加的是空白的lb吗?不是带抗性的吧?如果你师姐能做成来,至少证明片段什么的没问题,那就考虑是什么液体加错了。
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问
CRISPR全基因组慢病毒文库感染细胞后,检测每种gRNA感染细胞个数,提细胞基因组后,PCR时需要加多少量?
秋秋欣欣
只要细胞量足够,根据试剂盒操作手册来做就可以。
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问
核酸浓度和所含碱基数有关系吗?
秋秋欣欣
核酸浓度和所含碱基数没有关系的
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Southern Blot酶切电泳
迟C迟
Buffer看着跑到头了,样品就很容易跑出去,还是换成长胶,电压低一点慢慢跑,注意不要跑出去。
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Protein a纯化
bamboopiggy
你应该是放tris碱吧?本身就是酸性洗脱,你再放tris酸,不合适,用tris碱去中和
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问
膜蛋白提取
bamboopiggy
这个蛋白比较大,你可能需要比较多的细胞,操作过程注意冰上进行。一般国外公司的kit会比较好用。
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问
请问微卫星灶的杂合性缺失属于微卫星不稳定吗?
汤姆卜丽波
MSI是肿瘤常见的分子遗传改变,可作为肿瘤的克隆标志应用于肿瘤的早期诊断。肿瘤常在抑癌基因位点出现LOH,应用微卫星标志容易检测,通过检测分析肿瘤染色体LOH及其规律,可在染色体一定范围内发现肿瘤的抑癌基因及易感基因,可以说一般二者伴随出现
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问
载体和DNA连接体系,怎么计算加样体积?
bamboopiggy
这个一般算的是摩尔比,你直接拿你测的浓度,除以碱基数,然后二者相比,有4-10:1就可以
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问
解靶基因序列检索以及常用引物设计原则是什么?
秋秋欣欣
引物设计的原则是:1、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。2、引物长度一般在15-30碱基之间。3、引物GC含量在40%-60%之间,Tm值最好接近72℃。4、引物3′端要避开密码子的第3位。5、引物3′端不能选择A,最好选择T。6、碱基要随机分布。7、引物自身及引物之间不应存在互补序列。8、引物5′端和中间△G值应该相对较高,而3′端△G值较低。9、引物的5′端可以修饰,而3′端不可修饰。1
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问
酶切实验中如何避免假阳性
dxy_g9y5gije
首先,多做几个重复,这样容易发现是否出现假阳性其次设置对照,未酶切片段和酶切片段同时跑胶,应当存在明显差异
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问
真菌基因组DNA酶切后
迟C迟
如果是单酶切,线性DNA应该比环装DNA大。如果是双酶切,应该有多条带,比环装DNA小。
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问
小鼠椎间盘蛋白提取完毕后煮沸变性为什么会有沉淀?
whilt-shirt
这种情况有可能是裂解不完全导致的
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问
甘油法制备的感受态,是可以直接用热激转化还是可以电转?
迟C迟
感受态细胞制备方法不影响后续电转,可以用电激法转化。
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问
求救!大肠杆菌原生质体制备方法
迟C迟
1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB(或其他营养丰富的培养基)的1-2升挡板摇瓶中5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时6. 定时监控O.
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问
想问下大家,如何确定一个临床常见药物的基因靶点,想检测下它的基因多态性,谢谢~
汤姆卜丽波
一方面是通过查询现在的药物的资料,大数据分析,另一方面就是实验分析,比如多色探针熔解曲线分析
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问
如何查找基因的野生型基因?
秋秋欣欣
可以在NCBI上面查找,WT即为野生型基因
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问
水稻OsMAPKKKK基因预测定位在核
秋秋欣欣
杂交定位一下看具体是在哪个位置
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问
对于pcr引物设计和荧光定量pcr引物设计的根本区别在哪里?
dxywode
一、方法不同1、普通pcr引物设计:引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。2、荧光定量pcr引物设计:通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,标记跟踪PCR产物进行实时监测反应,利用与之相适应的软件对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度二、原理不同1、普通pcr引物设计:为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。2、荧光定量pcr引物设计:在PCR反应体系中加入荧光基团
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问
可以在两个融合蛋白间的linker边上再加酶切位点吗?
天一湖医者
这个看情况,如果linker不是很长,可以在引物合成的时候直接合成进去。
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