求救！大肠杆菌原生质体制备方法

1. 将适合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37°C下过夜培养

2. 高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用

3. 准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用

4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB（或其他营养丰富的培养基）的1-2升挡板摇瓶中

5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时

6. 定时监控O.D.600值（培养1小时后每半小时测定一次）

7. 当O.D.600值达到0.5-1.0时，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少15分钟（需要的话这种方式可以存放培养液数小时）

8. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟，弃上清液（如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天）

9. 用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中（几毫升），然后加水稀释至离心管的2/3体积。

10. 照上面步骤重复离心，小心弃去上清液

11. 照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞

12. 离心，弃上清液

13. 用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞 14. 照上面步骤离心，小心弃去上清液（沉淀可能会很松散）

15. 用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-3ml

16. 将细胞按150μl等份装入微量离心管，于-80°C保存

可以看下大肠杆菌原生质体制备的方法。

以0.3%浓度的溶菌酶，37度作用45min