酶切实验中如何避免假阳性

首先，多做几个重复，这样容易发现是否出现假阳性

其次设置对照，未酶切片段和酶切片段同时跑胶，应当存在明显差异

可以适当延长酶切时间，切完之后凝胶电泳可以用原始质粒做对照一起跑胶观察。

酶切实验操作过程中需要注意以下几个小细节：
1. 记得加牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin, BSA），达到稳定限制性酶的效果，并且减少内切酶粘附试管壁的情况。传统的方法是单独购买BSA溶液，现在越来越多的缓冲液例如Tango Buffer或是Mastermix都含有BSA，从而使酶切实验更为简便。
2. 如果限制性酶的反应效率在含盐缓冲液中(e.g., NEBuffer 3.1) 很低，说明很有可能这种酶对盐量敏感。在DNA 的制备过程中，要尽量清除掉溶液中的盐分。
3. 限制性酶的总体积要少于总反应液体积的10%。用于保存酶的甘油如果过多，会抑制酶切反应，大大降低酶切的效率。
4. 在保证第3条的前提下，加尽可能多的限制性酶来提升反应效率。这里要强调下一单位（1U）的定义，一单位酶可以在一小时内标准反应条件下酶切1 µg的DNA。如果担心甘油会抑制酶切，可以考虑购买单位浓度比较高的限制性酶。每一个生产商都会标明浓度单位，例如10U/µL。
5. 进行无酶切、单酶切测试。不管是什么实验，都要有控制实验来证明结果的有效性。不加入任何限制性酶，或是加入单一酶都可以很好的验证限制性酶的效率并且分辨出假阳性实验结果。
6. 查看限制性酶的反应效率表和相对应的保护碱基。限制性酶除了识别特定的DNA序列外，酶蛋白还要占据识别位点两边的若干个碱基，这些碱基对内切酶稳定的结合到DNA双链并发挥切割DNA作用是有很大影响的。每一个酶的工作效率和保护碱基的长短不尽相同，要根据个人使用的酶的特点来设计实验才能达到理想的效果。

您问的是酶切实验？还是什么？我没有查到什么是酶流实验。如果是酶切实验，您做好阴性对照。其实不管什么实验，只要您做好了阴性对照和阳性对照，会避免假阳性。

实验中FITC 染料发射出的光可以被 PE 光路通道吸收到，导致出现假阳性的结果。因此需要补偿调节，把 PE 通路吸收到的光消掉，去掉假阳性结果。