熬夜一时爽，一直熬夜火葬场！研究表明，熬夜会严重影响身体健康，科研小伙伴们得注意平衡昼夜节律啊！ 本周学术君继续带来 CNS 最新科研进展，助力大家勇攀学术高峰！ 1. Neuron：早期爱的抱抱促进愉悦社交的神经环路机制 肢体触摸比语言或其他情感交流的效果强数倍。 2022 年 1 月 18 日，北京大学于翔教授团队在 Neuron 杂志上发表研究论文 Social touch-like tactile stimulation activates a tachykinin1-oxytocin pathway to promote social interactions。 该研究建立了对幼年小鼠进行肢体抚摸的行为范式，发现早期抚摸对于小鼠成年后的社交活动具有积极意义，揭示了早期抚摸促进愉悦社交的神经环路机制！图 1：来源 Neuron 2. Nature Genetics：感染新冠后嗅觉味觉丧失的原因 感染新冠的病人嗅觉和味觉会不同程度地受到损伤。 2022 年 1 月 17 日，美国 23andMe 公司 Adam Auton 研究员团队在 Nature Genetics 杂志发表研

每月一次的生理期（月经）是女性身体健康状况的反映，不管是青春期、孕前后还是绝经后女性，想必都曾受到过月经出血量过多或过少的困扰。 众所周知，许多外界因素会影响月经周期的长度和月经出血量，包括饮食、睡眠和运动，以及疾病、旅行和压力。不少女生为了每月能够拥有舒适的生理期，不影响正常的工作和学习节奏，在养生方面可谓是煞费苦心。 然而，总会有些许不可控的因素影响着女性的生理周期。最新一项大规模研究调查显示，接种新冠疫苗会影响女性月经期出血量，42% 的女性参与者表示接种后经期出血量比平时更多！ 2022 年 7 月 15 日，美国伊利诺大学厄巴纳－香槟分校 Kathryn Clancy 教授和圣路易斯华盛顿大学医学院 Katharine Lee 教授在 Science Advances 杂志发表研究论文 Investigating trends in those who experience menstrual bleeding changes after SARS-CoV-2 vaccination。该研究以数量超过 3.5 万、接种了新冠疫苗的女性作为调查对象，证实了新冠疫苗对于女性生理期

2019 年, 著名医学杂志 Lancet 发表 2017 年全球疾病研究系列报告，指出全球不良饮食相关的死亡中，有三大因素分别为高盐饮食，全谷类摄入不足和水果摄入不足。 近几十年来，中国的心血管疾病发生率迅速上升，由心血管病导致的死亡已占我国总死亡的 45%。在我国因不良饮食而导致的心血管疾病死亡率高居世界前列。 面对不健康饮食对人类健康的危害，欧美国家先后开发了多种健康膳食模式。其中，美国的 DASH 饮食和欧洲的地中海饮食最为流行，并已被研究证明能够降低血压、改善血脂，有利于心血管健康。然而，这些来自西方饮食文化的膳食模式并不符合中国人的饮食习惯，因此难以在中国人群体中推广开来。 为了让中国人能吃上符合自己口味的健康膳食，北京大学临床研究所武阳丰教授提出了要开发符合中国人口味的健康膳食，并以符合中餐文化且 「好吃、不贵、又健康」作为「中国健康膳食」的开发目标。 2022 年 7 月 11 日，北京大学临床研究所武阳丰教授与王燕芳研究员共同领导的最新研究发表于美国心脏协会旗舰期刊《循环》（Circulation, IF = 39.918）。该研究中开发了「中国心脏健康膳食」并对其降

上世纪 60 年代，医生在检查人体白细胞中的染色体数目时，出乎预料地发现男性的一些白细胞会丢失部分 Y 染色体，并且随着年龄增长，Y 染色体丢失的频率越高。 男性白细胞中 Y 染色体的丢失，可能与疾病和死亡率有关，但之前尚未确定明确其中的因果关系。 2022 年 7 月 14 日，乌普萨拉大学的研究人员在 Science 杂志上发表了一项国际研究论文。研究中表明，男性白细胞中 Y 染色体的丢失会导致心脏纤维化，心脏功能受损以及心血管疾病引起的死亡。图片来源：Science之前的研究调查表明，男性的平均寿命比女性短五年左右。该研究的通讯作者 Kenneth Walsh 表示，该研究中揭示的男性 Y 染色体的丢失所造成的健康影响或许可以解释男女寿命的差异。男性体内部分细胞中的 Y 染色体丢失被称为 mLOY（mosaic loss of chromosome Y, Y 染色体镶嵌丢失），这是一个很常见的现象，在至少 20% 的 60 岁男性和 40% 的 70 岁男性中被检测到。此前的研究表明，血液中含有 mLOY 的男性患与年龄相关的疾病（如癌症和阿尔茨海默病）的风险增加。本研究中证实，

众所周知，男性和女性之间存在明显的差异，无论是从生理和思维，还是从健康和行为，两性之间都有着天壤之别。更加令人惊奇的是，男性和女性在晒太阳的反应上竟然也有区别。 2022 年 7 月 11 日，由以色列特拉维夫大学萨克勒医学院人类遗传学和生物化学系的 Carmit Levy 领衔的团队在 Nature Metabolism 上发表了题为 Food-seeking behavior is triggered by skin ultraviolet exposure in males 的研究性论文，发现紫外线（UV）辐射对男性和女性产生不同的影响，阳光暴露刺激了男性而不是女性的觅食行为，其机制是依赖于皮肤脂肪细胞的饥饿素（Ghrelin，一种刺激食物摄入的激素）的分泌。图片来源：参考资料 [1]研究背景 晒太阳这事儿，可以说是一把双刃剑。过度晒太阳，可能会灼伤皮肤，严重甚至会造成皮肤癌。相反，适当晒晒太阳，可以补充维生素 D，增加肝脏代谢，保护器官免受肝细胞脂毒性和代谢疾病，而且可以防止心血管疾病和其他死亡原因。然而，男性和女性对 UV 辐射等环境因素的反应是否不同仍有待研究。 研究内容

1.无染色/弱染色2.高背景/非特异性染色3.染色异常情况

#01 什么是同型对照？同型对照（Isotype Control），是指与使用的流式抗体具有相同种属来源、亚型、荧光标记物、使用剂量和浓度，但对目标靶点无特异性结合的抗体。同型对照通常用来消除抗体与抗原的非特异性结合造成的背景染色。 #02 为什么要做同型对照？流式抗体与靶标的结合，是通过抗体的 Fab 端与靶标 Marker 进行特异性结合而完成的。白细胞（除T细胞外）表面大多表达 CD16、CD32、CD64 等 Fc 受体，这些受体可与各种抗体的 Fc 端非特异性结合，出现非特异性染色。其中，以单核细胞、巨噬细胞尤甚。此外，除 Fc 受体的影响外，在活细胞的表面染色实验中，单核细胞和巨噬细胞均存在吞噬抗体或与荧光染料发生非特异性结合的现象。并且，在多色流式实验中，还存在荧光背景的影响及药物处理的影响，即便对 Fc 受体进行了封闭，在分群不好的情况下，依然需要用到同型对照。此时，同型对照的使用也就十分重要。实验时，如果仅仅参照空白对照来圈门，就可能出现一部分假阳性结果。如果参考同型对照来区分阴阳性，就能够把这部分非特异性结合造成的假阳性排除。 FcR分子 目标蛋白分子 以 CD45

人外周血PBMC的制备流程收集抗凝人外周血，用 1640 无血清培养基或 PBS 按照 1:1 的比例稀释，上下颠倒混匀或者用移液枪吹打混匀。在 15 mL 离心管中，先加入 3 mL 充分混匀的 Ficoll 液（1.077 g/mL），再沿着管壁缓慢加入2 mL稀释后的血液，血液和 Ficoll 液分层明显为成功。注：Ficoll 提前半小时从 4℃ 冰箱取出恢复到室温，温度过高会导致分离不明显，温度过低会导致密度过大，同样分离效果不好， 20~25℃ 最佳。。将样本小心转移到离心机，500 g 离心 25 min。小心取出离心管，吸取中间层的白色薄膜层，即为单个核细胞。用 10 mL PBS 洗涤获得的单个核细胞，250g 离心 10 min，弃上清。重复洗涤一次。用细胞染色缓冲液重悬细胞备用。注意事项：Ficoll 使用时的温度很重要，温度太高或者太低都会影响分离效果。血液样本最好为新鲜抗凝血（采血 2 h 以内），为保持细胞活力，应避免冷冻和冷藏。3.50 mL 离心管离心效率比 15 mL 离心管差，为了获得最大量的单核细胞，最好用15 mL离心管，且离心管使用量不要超过三

小鼠腹水及单细胞悬液制备流程配制 6% 淀粉肉汤。6% 淀粉肉汤配制方法：牛肉膏 0.3g、蛋白胨 1.0g、氯化钠 0.5g、蒸馏水 100mL，上述材料混合加热后加入可溶性淀粉 6.0g；溶解后，121℃ 高压灭菌 15~20 min，EP 管分装封口，将肉汤放置于 4℃ 保存。小鼠腹腔注射 1mL 6% 淀粉肉汤（注意避开肠管和内脏），刺激 60~72h。颈椎脱臼法处死小鼠，用 75% 酒精浸泡小鼠 5min。将小鼠置于解剖板中，固定四肢，剪开皮肤，充分暴露腹膜。用眼科镊子提起腹膜，用 5mL 注射器往小鼠腹腔注射 2.5mL 预冷 PBS（勿扎到脏器），轻揉小鼠腹部1~2 min。注射器回抽腹腔灌洗液，收集于15mL 离心管中。重复第 5 步 5 次，冲洗腹腔，可观察到冲洗液逐渐澄清。将收集的腹腔灌洗液 300 g 离心 5 min，弃上清。用细胞染色缓冲液或者含 10% 胎牛血清的 1640 培养液重悬细胞。进行细胞计数，并调整细胞浓度至 1×107/mL。注意事项：若第 7 步离心弃上清后发现细胞沉淀中有较多红细胞，且检测目的细胞非红细胞，先加入适量红细胞裂解液裂解红细胞（

小鼠淋巴结单细胞悬液制备流程将小鼠颈椎脱臼处死，75% 酒精浸泡 5min，取出小鼠，腹部朝上置于无菌操作台上。用剪子从胸骨起沿正中线一直到颌下将皮肤剪开，再从颌下向左右耳根的方向切开皮肤。用镊子夹着皮肤向左右掀开并用针固定，即可见到胸骨上方的一对体积较大的颌下腺。在左右颌下腺各自的上缘，附着有黄色的颈前部淋巴结。剪断胸锁乳突肌和肌腹，并掀起它们两个断端，可见到左颌下腺背侧深部左、右各有一个小的颈深部淋巴结。用镊子和眼科小剪仔细将淋巴结摘除。取出淋巴结，并浸泡于干净的 PBS 溶液中。用无菌的 2.5mL注射器吸取培养液，左手用镊子夹持淋巴结，右手持注射器，小心插入淋巴结中吹打，至淋巴结细胞完全被吹打干净，观察只剩余白色的结缔组织和脂肪组织为止。将吹打出来的胸腺细胞用 200 目筛网过滤，收集于 15mL 离心管，300g 离心 5min，弃上清。用细胞染色缓冲液重悬胸腺细胞，计数，并调整细胞浓度至 1×107/mL。注意事项：颈部淋巴结颈浅部淋巴结位于左右颌下腺之浅表和外侧，常为脂肪组织所包绕，呈卵圆形。颈深部淋巴结位于左右胸乳突肌和锁乳突肌腹侧的深处，舌骨下方肌肉群的外侧，即颌下腹

小鼠外周血单细胞悬液制备采集小鼠外周血样本于抗凝管中。离心管内加入 100 μL 新鲜血，加入 1 Test 对应流式抗体，混匀，4℃ 避光孵育 30 min。加入 2 mL 1×红细胞裂解液，混匀，4℃ 裂解 5 min。300 g 离心 5 min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃上清可得到白色的细胞沉淀。PBS 洗涤一遍。加入 200 μL 细胞染色缓冲液重悬细胞，用流式细胞仪进行检测和分析。注意事项：采血用抗凝管，有肝素和 EDTA 两种，若直接裂解红细胞后进行后续染色实验，两种抗凝管都可使用；如果是采血后进行 PBMC 细胞分离，则必须使用肝素抗凝。裂解液推荐使用 E-CK-A105 10× ACK Lysis Buffer，不含固定剂。10× ACK Lysis Buffer 实验前需用纯水稀释成 1×，现配现用，推荐 4℃ 条件下暂存，当天使用。检测小鼠外周血中常规指标，可用过夜保存的样本，一般来说问题不大，但是对于表达量比较低的指标，建议用新鲜的样本检测。小鼠外周血中细胞量比较低，建议用先染色后裂解的方法。这种方法可以减少样本处理过程中洗涤的次数，从而降低细胞

小鼠肿瘤样本制备颈椎脱臼法将荷瘤小鼠处死，75% 酒精浸泡 5 min，取出小鼠置于无菌操作台上。左手持镊子，右手持弯剪，沿肿瘤边缘剪下长约 1cm 的口子，可清晰看见肿瘤附着于皮下，沿肿瘤边缘轻轻剪开连接处，剥离肿瘤。将剥离的肿瘤放入100 mm 的培养皿中，并在室温下加入 5~10 mL 的 1640 基础培养基。 单细胞悬液的制备A.混合酶消化法待所有肿瘤剥离完毕后，将肿瘤转移至 1.5 mL EP 管中，手持弯剪将肿瘤充分剪碎，边剪边加入1640基础培养基，静置数秒，使用 1 mL 移液器吸出上层较小颗粒，继续剪碎组织，重复加入1640基础培养基，直至所有的组织大小均符合要求。将肿瘤组织悬液转移至 50 mL 离心管中，加入 1640 基础培养基，250 g离心5 min，弃上清，加入4.5 mL 的 1640 基础培养基，重悬细胞沉淀并转移至培养皿中。加入 500 μL 的 10×Triple Enzyme stock solution 混合酶溶液，轻轻吹打至充分混匀，转移至37℃水浴摇床消化孵育 1~2 h。消化结束后用 1640 基础培养基或者 PBS 稀释，再用 200

一、样本准备收集细胞，200 目筛网过滤，收集滤液，300g 离心 5 min，弃上清。向细胞中加入适量细胞染色 buffer(或含1%BSA的PBS)，用移液枪轻轻吹打细胞重悬。 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后，调整细胞浓度约为 1 × 107/mL。 三、设置实验分组 根据实验设计，设置实验分组，每管加入 100μL 细胞悬液。四、封闭 Fc 受体封闭 Fc 受体能减少染色过程中的非特异性染色。小鼠中，纯化的 CD16/CD32 单抗能和 FcγR Ⅲ/Ⅱ结合，封闭非特异性染色，使阴性细胞的背景荧光降至未标记细胞的水平。加入 0.5-1μg 纯的抗小鼠 CD16/32 单克隆抗体，室温孵育 10min。对于人和大鼠，可直接使用过量的与荧光抗体相同来源和亚型的纯化 Ig 或者与目标种属相同来源血清进行阻断，或者用商业化的 Fc 受体阻断剂。 五、细胞表面抗体孵育根据实验设计，除空白对照外，对应的单染管、全染管加入相应的抗体 5μL，混匀，4℃ 避光孵育 30min。 六、固定破膜按照说明书稀释固定破膜液。每管加入1mL 细胞染色 buffer，300g 离心 5

免疫系统是机体抵御外来入侵、清理自身异化细胞或组织的重要组成部分，关乎生物的健康与生存，一直以来是生物学和医学研究的重点和热点领域。在机体的生理和病理过程时，免疫细胞通过脉管系统和血液循环从淋巴器官抵达全身，对血液中免疫细胞的流式分析是生物学和医学研究中最常用的了解机体免疫状态的检查手段之一。血液中的细胞主要分为红细胞（Erythrocytes/Red Blood Cells）和白细胞（Leukocytes/White Blood Cells）。我们常常所说的免疫细胞指的是血液中的白细胞。机体中几乎所有的免疫应答过程，都是由各种不同的白细胞相互协作完成，因此它们也一直都是各种感染、炎症、自身免疫疾病、移植等模型研究的主要对象。Figure1. 造血干细胞分化树白细胞从起源上分为淋巴细胞和髓系细胞。血液中几乎所有细胞都有相同的来源——造血干细胞（Hematopoietic Stem Cells，HSC）。造血干细胞在骨髓中分化为共同淋巴样祖细胞（Common Lymphoid Progenitors，CLP）和共同髓系祖细胞（Common Myeloid Progenitors，CMP）

CD45 由一类结构相似、分子量较大的跨膜蛋白组成，广泛存在于白细胞表面。CD45 分子在所有白细胞上都有表达，是细胞膜上信号传导的关键分子，在淋巴细胞的发育成熟，功能调节及信号传递中具有重要意义，其分布可作为某些 T 细胞亚群的分类标志。 图一：CD45/SSC-H与FSC-H/SSC-H分群对比 ❖ 如左图所示，通过 CD45 与 SSC-H，可以非常快速地圈出淋巴细胞亚群。❖ 如右图所示，使用 FSC-H 与 SSC-H 确定细胞群分布时，如果不染 CD45，加上有时红细胞裂解效果不佳，淋巴细胞群容易与红细胞及细胞碎片分群不清晰，且易有单核细胞混杂，不利于圈门位置的确定。而通过 CD45/SSC 圈门，可以使圈出的淋巴细胞更纯。 中华人民共和国卫生行业标准文件中的《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》也指出：建议联合 CD45 和 SSC 设门，确定淋巴细胞群。淋巴细胞群通常呈现 CD45 强阳性和 SSC 弱表达；相对于淋巴细胞，单核细胞的 CD45 呈弱表达，SSC 呈中等强度表达；嗜碱性粒细胞的 CD45 和 SSC 均为弱表达。同时，CD45 在三色、四色抗体组合方案

昼夜节律紊乱，如熬夜不睡、夜班工作，可能会对健康产生多种不良影响。其中，也与心脏疾病的发生有关，目前尚不清楚心脏分子时钟功能障碍是否与自然发生的人类心脏病进展有关。核受体 Rev-erbα/β 是生物钟的关键组成部分，已成为心脏病的药物靶点，但心脏 Rev-erb 的功能在体内尚未得到研究。 2022 年 1 月 17 日，美国德克萨斯州贝勒医学院孙正，中国医学科学院宋江平，和中国温州医科大学附属第二医院等多家单位合作，在 Circulation 上发表了题为 Myocardial Rev-erb-Mediated Diurnal Metabolic Rhythm and Obesity Paradox 的研究性论文，发现心肌细胞中的 Rev-erbα/β 介导正常的代谢节律，使心肌细胞在小鼠休息时间（白天）更喜欢脂质作为能量来源，去除 Rev-erbα/β 会破坏这种节律，降低心肌细胞在休息时间使用脂质的能力，并导致进行性扩张型心肌病和致命的心力衰竭。图片来源：Circulation研究内容 Rev-CKO 小鼠出现进行性收缩功能障碍和致死性心力衰竭 Rev-erbα 和 Rev-e

导读 镁，作为哺乳动物细胞内最重要的微量营养素之一，参与数百种的化学反应和生物学过程，例如，协助肌肉收缩，调控心脏正常的节律等。最新的研究还表明，镁在免疫系统发挥功能的过程中扮演着重要的角色，但其具体的分子机制尚未明确。 此外，低镁饮食或低镁血症与各种疾病的病理生理学相关，包括感染和癌症。当小鼠接受低镁饮食时，癌细胞在小鼠体内的扩散速度更快，而且它们对流感病毒的防御能力也受损。然而，到目前为止，关于这种矿物质究竟如何影响免疫系统的研究还很少。 2022 年 1 月 20 日，来自瑞士巴塞尔大学等单位的研究团队在 Cell 发表了题为 Magnesium sensing via LFA-1 regulates CD8+ T cell-effector function 的研究性文章，他们发现共刺激细胞表面分子 LFA-1 需要镁来改变其构象，从而促进其活化 CD8+ T 细胞的能力，最终增强 CD8+ T 的细胞毒性。同时，镁的参与也可显著提高病原体和肿瘤特异性 T 细胞的效能，增强了双特异性 T 细胞抗体的效力，并改善了 CAR-T 细胞的功能等。 总的来说，这项研究拓宽了领域内对镁在

经典型瞬时受体电势通道 TRPC 是一类通透钙离子的非选择性阳离子通道1，与最早在果蝇感光系统中发现的 TRP 通道的序列相似性最高2,3，并且可以被第二信使 DAG 所激活。根据序列相似性以及通道的电生理特性，TRPC3/6/7 形成了一个亚类4。TRPC3/6/7 通道参与多种神经活动，例如 TRPC3 在中枢神经系统高表达，参与神经生长因子 BDNF 信号转导5，同时 TRPC3 还与神经突触信号传递以及运动协调有关6,7。TRPC6 通道可以促进神经元存活以及兴奋性突触的形成等8,9。除此之外，TRPC3/6/7 通道也参与肌源性血管收缩，血压调节等过程，并且和多种疾病的发生有关，比如病理性心肌肥大，癌症发生，糖尿病等10。其中人源 TRPC6 基因功能获得性突变（GOF）会引发局灶节段性肾小球硬化症（FSGS）11,12。因此，TRPC6 通道的抑制剂有望用于治疗该类疾病。2007 年有低分辨率冷冻电镜研究表明 TRPC3 的胞质区可能存在一个空腔13，但由于分辨率所限，以及重构所得电子密度存在较多噪音，该空腔的具体结构细节并不清楚。2017 年陈雷课题组和吕伟/杜鹃课题组分

近日，中南大学湘雅二医院麻醉科戴茹萍教授团队在自然指数期刊、Science 子刊Science Advances（IF = 14.1）发表了题为 Upregulation of proBDNF/p75NTR signaling in antibody-secreting cells drives systemic lupus erythematosus 的原创研究，揭示了 proBDNF 在自身免疫性疾病系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus, SLE）中的重要致病以及干预靶点作用。戴茹萍教授课题组一直致力于脑源性神经营养因子前体（Bain-derived neurotrophic factor precursor, proBDNF）的免疫功能研究。以往 proBDNF 被认为在神经系统中发挥作用，课题组前期研究开拓性地发现 proBDNF 介导多种免疫炎症性疾病发生发展，包括脓毒症相关脑病 （Journal of Neuroinflammmation, 2020）、主动脉夹层疾病 (FASEB J, 2020) 和多发性硬化症 (Therano

自然界的蚊媒病毒有数百种之多，可由蚊虫携带并传播给人类及动物宿主，引起病毒性脑炎、脑膜炎及出血热等严重疾病。近二十年来，以登革病毒、寨卡病毒、基孔肯亚病毒、西尼罗病毒为代表的新发及再发蚊媒病毒在全世界流行，每年可导致数十亿人感染、数十万人死亡。 以登革病毒为例，全世界大约有 25 亿人口生活在登革病毒流行地区，每年约有 3.9 亿人被登革病毒感染或重复感染，并导致 50~100 万人入院治疗，全世界范围内已有 100 多个国家及地区出现登革热的感染流行。据报道，登革热 2022 年度再次在巴西、新加坡、马来西亚等国家大规模暴发流行，目前已导致超 65 万人感染入院治疗（截止 2022 年 5 月份）。 由于登革病毒等重要蚊媒病毒的致病机制特殊，其感染或免疫后产生的抗体具有增强感染的作用（抗体依赖增强效应，ADE 效应），使得传统的传染病预防（疫苗）及治疗（药物）策略研发受阻。到目前为止，多数烈性蚊媒病毒均无有效疫苗和针对性治疗药物，科学界亟需深入研究蚊媒病毒在自然界中流行传播的基本原理，并研发新型防控策略阻断病毒在世界范围内的大规模传播。 2022 年 6 月 30 日，清华大学医学院