小鼠外周血单细胞悬液制备流程及注意事项

小鼠外周血单细胞悬液制备

1. 采集小鼠外周血样本于抗凝管中。
2. 离心管内加入 100 μL 新鲜血，加入 1 Test 对应流式抗体，混匀，4℃ 避光孵育 30 min。
3. 加入 2 mL 1×红细胞裂解液，混匀，4℃ 裂解 5 min。
4. 300 g 离心 5 min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃上清可得到白色的细胞沉淀。
5. PBS 洗涤一遍。

加入 200 μL 细胞染色缓冲液重悬细胞，用流式细胞仪进行检测和分析。

注意事项：

1. 采血用抗凝管，有肝素和 EDTA 两种，若直接裂解红细胞后进行后续染色实验，两种抗凝管都可使用；如果是采血后进行 PBMC 细胞分离，则必须使用肝素抗凝。
2. 裂解液推荐使用 E-CK-A105 10× ACK Lysis Buffer，不含固定剂。
3. 10× ACK Lysis Buffer 实验前需用纯水稀释成 1×，现配现用，推荐 4℃ 条件下暂存，当天使用。
4. 检测小鼠外周血中常规指标，可用过夜保存的样本，一般来说问题不大，但是对于表达量比较低的指标，建议用新鲜的样本检测。
5. 小鼠外周血中细胞量比较低，建议用先染色后裂解的方法。这种方法可以减少样本处理过程中洗涤的次数，从而降低细胞的损失，避免有些比例较低的细胞检测不到。