小鼠胸腺单细胞悬液制备流程及注意事项

小鼠胸腺单细胞悬液制备流程

1. 1.用颈椎脱臼法处死小鼠，75%酒精浸泡5 min后，取出小鼠置于无菌操作台上，腹部朝上。
2. 小鼠胸骨下方剪开小鼠的胸腔，可看到白色透明胸腺，呈两叶分布，位于两肺的前方，胸骨的正后方。
3. 取出胸腺并浸泡于干净的PBS溶液中。
4. 将胸腺置于200目筛网中，用组织研磨棒轻轻研磨至没有明显块状物。
5. 用15 mL PBS冲洗筛网，并将冲洗液收集于15 mL离心管，300 g离心5 min，弃上清。
6. 用细胞染色缓冲液重悬胸腺细胞，并调整细胞浓度至1×10⁷/mL。

   注意事项:

   1. 打开胸腔分离胸腺，注意不要切断大血管及弄破心脏。
   2. 如有必要，可在处死小鼠前向腹腔注入0.1 mL黑墨水，染黑胸腔各淋巴结，便于识别和摘除。
   3. 3~6周龄的小鼠，一般可获得2 ×10⁸个细胞。随小鼠年龄增长，胸腺细胞逐渐减少。