流式课堂 | 联合 CD45 及 SSC 设门的意义

CD45 由一类结构相似、分子量较大的跨膜蛋白组成，广泛存在于白细胞表面。CD45 分子在所有白细胞上都有表达，是细胞膜上信号传导的关键分子，在淋巴细胞的发育成熟，功能调节及信号传递中具有重要意义，其分布可作为某些 T 细胞亚群的分类标志。

图一：CD45/SSC-H与FSC-H/SSC-H分群对比

❖ 如左图所示，通过 CD45 与 SSC-H，可以非常快速地圈出淋巴细胞亚群。

❖ 如右图所示，使用 FSC-H 与 SSC-H 确定细胞群分布时，如果不染 CD45，加上有时红细胞裂解效果不佳，淋巴细胞群容易与红细胞及细胞碎片分群不清晰，且易有单核细胞混杂，不利于圈门位置的确定。而通过 CD45/SSC 圈门，可以使圈出的淋巴细胞更纯。

中华人民共和国卫生行业标准文件中的《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》也指出：建议联合 CD45 和 SSC 设门，确定淋巴细胞群。淋巴细胞群通常呈现 CD45 强阳性和 SSC 弱表达；相对于淋巴细胞，单核细胞的 CD45 呈弱表达，SSC 呈中等强度表达；嗜碱性粒细胞的 CD45 和 SSC 均为弱表达。同时，CD45 在三色、四色抗体组合方案的每一检测标本管中均存在，在对淋巴细胞群进行设门的同时，也具有监测和评估标本管间变异性的作用。

图二：外周血 CD45 与 SSC 细胞分群散点图

那么，在哪些情况下，一定要染 CD45 呢？

例如，有些病人的外周血样本分布，与正常样本存在较大差异时，必须通过 CD45 来分出淋巴细胞亚群。

此外，目前研究较多的肿瘤样本，在检测免疫细胞分群时，也一定要染 CD45。因为肿瘤组织处理的单细胞悬液中，大部分是肿瘤细胞与组织细胞，免疫细胞的含量一般较少，如果不染 CD45，将导致结果无法分析。

综上，当样本处理不佳或样本类型特殊，无法通过 FSC/SSC 区分出明确的免疫细胞形态时，联合 CD45 及 SSC 设门，是十分关键且必要的。