动物流式实验怎么设门？

一般根据散射光进行设门，即我们通常所说的前散（forward scatter, FSC）和侧散（side scatter, SSC）来设门。FSC的大小与细胞的直径成正相关，不同的细胞，细胞越大，其FSC越大；反之越小。SSC的大小与细胞内颗粒结构的质量成正相关，不同的细胞，细胞内颗粒结构越复杂，质量越大，其SSC越大；反之越小。

所谓的门，在流式细胞仪检测的时候术语叫做gate。

流式细胞仪是针对细胞（后者颗粒）的群来做研究的。往往是先选中感兴趣的一个细胞群，再分析下一步的染色，可以进行很多分级。比如先从所有细胞中画出淋巴细胞，可以在FSC-SSC散点图上画出淋巴细胞的群，比如一个方框，或者任意曲线的gate，也就是所谓的门。把淋巴细胞括在内。然后在另外一个散点图上只显示这个gate里的细胞，但是把横坐标和纵坐标改为其他荧光标记。

总之，门就是一个选择细胞群的手段。

为了正确地识别目的细胞，需要综合生物知识和流式操作经验，才能正确的圈出表示最终结果的目的区域。设门是一个全有或全无数据减少处理。将门内细胞内移动到下一个分析要点，而同时门外的细胞即通过像素，也被排除在外。

1. 尽可能多地了解目的细胞群体

2. 细胞大小并不代表一切

3. 检测上机时的稳定性

检测上机时的稳定性，选取一个散点图观察上机的流速均匀性。通过这样一个图可排除上机操作不当的人为误差。

4. 双峰的消除

细胞团块，当它们通过激光截距，将比单个细胞长。这反过来又影响了信号的区域。使用脉冲几何门（如 FSC-H x FSC-A），双峰可以容易被消除。

5. 通过对照组引导

在设门方案中假设感兴趣的门不能使用，可用反向设门工具检测数据，以确定哪些细胞将落于最终群体

方法有几种: (1) 阈值设门。FSC (前向散射光)是最常用的阈值参数。FSC和细胞的大小正相关。用FSC设阈值，可以使低于该阈值的细胞碎片等其他杂质的信号不被处理。(2) 散射光设门。以FSC和SSC (侧向散射光)联合设门较常用。其最大优点是可以排除碎片或噪声的干扰。可以根据FSCvsSSC散点图.上不同细胞分布不同来设门目的细胞群。

另外还有荧光设门、反向设门和组合设门。流式细胞术的数据分析过程实际上就是选门和设门的过程。应该注意到设门是-一个主观行为，是人为做出的决定，不同的人设门会存在很大差异，它是流式细胞术中最难掌握的技术。因此，对设门有2点需要把握:首先，设门尽可能客观;其次，应该认识到设门需要主观决策。为了尽量减少主观判断带来的误差，最好分选--些细胞用显微镜观察来进一-步确认门的客观性和准确性。

动物做流失，可以用三只空白小鼠的细胞混合物，然后设门