【实验目的】 掌握DNA印迹技术的基本原理， 学习DNA印迹技术的操作方法，了解DNA印迹技术的应用范围。 【实验原理】 DNA印迹是1975年由英国Southern创建的。其基本原理是：DNA分子经限制性核酸内切酶酶切后，由琼脂糖凝胶电泳将所得DNA片段按分子质量大小分离，然后将DNA片段变性，并使凝胶中的单链DNA片段转移到尼龙膜、硝酸纤维素膜(NC)或其他固相支持物上，此法中DNA片段由液流携带通过虹吸作用由下向上抽吸， ...

【实验目的】 熟悉蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理，掌握蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作方法，了解SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用范围。 【实验原理】 蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。当溶液pH值大于蛋白质等电点时，蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动；反之则向负极移动，这种带电的颗粒在电场中泳动的现象称为电泳（electrophoresis）。不同的蛋白质由于等电点 ...

蛋白质的提取工作是将经过处理或破碎的细胞，置于一定的条件和溶液中，让被提取物充分释放出来的过程。影响提取的因素主要是被提取物质在提取的溶液中溶解度的大小及由固相扩散到液相的难易程度。某一物质在溶剂中溶解度大小与该物质的分子结构及溶剂理化性质有关，一般遵守“相似相溶”的原则。扩散作用对蛋白质的提取有一定的影响。减小溶剂的黏度、搅拌和延长提取时间可以提高扩散速度，增加提取效果，提取的原则是“少量多次”，即对于等量的 ...

【实验目的】 掌握PCR技术的原理，学习PCR技术的基本方法，了解PCR技术的应用范围与意义。 【实验原理】 详见14章第2节。 【实验对象】 特定的DNA序列。 【试剂与器材】 引物(primer)，根据需扩增的DNA设计相应的引物；TagDNA聚合酶； 10×PCR缓冲液(随酶一起购买)；5mmol/L dNTP贮备液(商品化产品)；DNA模板(需扩增的 DNA)；双蒸水；矿物油；PCR反应管；微量移液器；离心机及PCR仪。 【实验方法与步骤】 标准的PCR操作程序是将 ...

【实验目的】 描述磺胺嘧啶单次静脉注射在家兔体内的药代动力学特征（房室模型）。 【实验原理】 药物代谢动力学主要研究机体对药物的处置过程，包括吸收、分布、代谢、排泄等。为了描述药物的体内处置过程，通常使用房室模型进行模拟。使用房室模型可计算相关药代动力学参数，如清除率（CL）、表观分布容积（Vd）、半衰期（t1/2）、消除速率常数（k）等。药物总清除率（overall clearance，CL）定义为单位时间内含有从机体清除总药量的血浆体积。 ...

【实验目的】 观察苯妥英和苯巴比妥的抗电惊厥作用。 【实验原理】 惊厥是指骨骼肌异常的非自主性强直与阵挛性抽搐，并引起关节的运动。若使用电刺激器，可以形成小鼠头部的强电流，从而产生全身强直性惊厥（前肢屈曲、后肢伸直），故用于模拟癫痫大发作模型。 苯妥英为临床常用的抗癫痫药，临床主要用于癫痫局限性发作和癫痫大发作，可治疗癫痫持续状态，对失神性发作无效甚至可能诱发；治疗剂量时不引起镇静催眠作用。苯巴比妥为镇静催眠药，同时具有较强的抗惊 ...

【实验目的】 测定家兔单次静脉注射水杨酸钠的生物半衰期（t1/2）。 【实验原理】 生物半衰期（t1/2）是描述药物在体内消除的重要参数，定义为药物在生物体内消除一半所需要的时间，单位通常为小时（h）。大多数药物遵循一级消除动力学规律（定比消除），其半衰期t1/2为恒定值。多次给药时，通常经过3~5个半衰期达到稳态血药浓度，因此测定半衰期t1/2具有重要的临床意义。实际中，可以通过测定药物血浆浓度，同时结合给药剂量和给药时间，计算半衰 ...

【实验目的】 观察有机磷酸酯类急性中毒症状，比较解磷定和阿托品的解毒作用 【实验原理】 有机磷酸酯类是难逆性胆碱酯酶抑制剂，可与乙酰胆碱酯酶（AchE）结合，使酶失去活性且难以恢复。体内乙酰胆碱酯酶可水解乙酰胆碱（Ach）并使其失效，故有机磷酸酯中毒可造成Ach在体内大量堆积。轻度急性中毒者以M-样症状为主；中度中毒者可同时出现M-样与N-样症状；重度中毒者除M-样与N-样症状外，尚伴有中枢神经系统症状（表23-5）。有机磷酸酯类中 ...

【实验目的】 测定药物对肝脏CYP450药物代谢酶的诱导和抑制作用。 【实验原理】 药物的体内代谢过程可分为I相反应（分解代谢）及II相反应（合成代谢）。I相反应包括氧化、还原和水解反应，主要由细胞色素P450（CYP450）酶催化。CYP450酶主要分布在肝脏，故又称作肝药酶。CYP450酶的诱导和抑制具有重要的临床意义，可导致临床上的药物相互作用。苯巴比妥钠为CYP450酶的诱导剂，而放线菌素D为CYP450酶的抑制剂。本 ...

【实验目的】 利用热板法评价药物的镇痛作用。 【实验原理】 小鼠的足底光滑裸露，无毛，适于热刺激致痛模型。若将小鼠置于温度55℃±0.5℃的金属热板上，则其“舔后足”现象可以作为出现疼痛反应的指标。通过考察疼痛反应的出现时间（痛阈），可以反映镇痛药的疗效。然而，热板法致痛模型主要用于筛选麻醉性镇痛药，并不适用于筛选解热镇痛药，后者可使用化学性致痛模型进行评价。 吗啡为中枢镇痛药，属于阿片类药物，主要作用于μ阿片受体。水杨酸钠为外周解热镇 ...

【实验目的】 1. 了解常规切片的制作过程。 2. 熟悉苏木素－伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色方法。 【实验原理】 将各种方法（活检、尸检）获取的组织标本经过一定的步骤处理，做成切片。苏木素是碱性染料，可将细胞核（嗜碱性物质）染成蓝色，伊红是酸性染料，可将多数细胞的细胞质（嗜酸性物质）染成红色，形成色彩鲜艳、结构清晰的组织图像。 【实验对象】　 尸检来源的正常肺组织。 【实验药品与器材】 1. 器材　手术刀、恒温箱、石蜡切片机、显微镜。 2. 试剂　10％福尔马林，梯度酒 ...

【实验目的】 1． 观察胃的解剖结构，掌握胃的位置、毗邻脏器和淋巴引流。 2． 观察胃和胃癌的组织结构，对比正常胃和胃癌的形态特点。 3． 观察慢性萎缩性胃炎和胃溃疡的形态变化，联系慢性胃炎、胃溃疡与胃癌之间的关系。 4． 观察胃癌和转移的大体标本，联系胃癌的扩散途径。 【实验对象】 正常胃标本和胃底组织切片，慢性萎缩性胃炎、慢性胃溃疡、胃癌和淋巴结转移性腺癌切片，胃溃疡、不同类型胃癌、卵巢转移性肿瘤的大体标本。 【实验内容】 1． 胃的解剖结构　观察胃贲门部、胃体部、胃底部和 ...

【实验目的】 1． 观察肺组织的解剖结构，掌握肺的形态、位置和分叶。 2． 观察肺的组织结构，掌握支气管壁的分层和肺泡的结构特点，了解肺导气部、呼吸部的组成。 3． 观察大、小叶性肺炎的大体标本和组织切片，掌握两者的病变特点及形态的异同点。 【实验对象】 尸检来源的正常肺和组织切片，大叶性肺炎和小叶性肺炎的大体标本和切片。 【实验内容】 1． 肺组织的解剖结构 （1）支气管：支气管由肺门进入肺部，呈树枝状分布。 （2）肺：一尖、一底（膈面）、二面（内侧面、肋面）和三缘（前缘、后缘、 ...

一、蛙坐骨神经双相、单相动作电位的引导测定 【实验目的】 1. 学习离体神经干双相和单相动作电位的记录方法。 2. 分析和判别动作电位的波形，测量其波幅、时程及潜伏期。 【实验原理】 神经纤维的兴奋表现为动作电位的产生和传导，所以神经纤维(nerve fibre)动作电位是神经兴奋的客观标志。对单根神经纤维而言，给其一个有效的阈或阈上刺激，便可产生一个可传播的兴奋，即动作电位。神经纤维兴奋部位相对于未兴奋部位来说呈负电，两者之间产生电位差。将两个引 ...

一、心泵功能的“双信息图”显示法 【实验目的】 学习心导管插管术及利用计算机进行左心室内压分析的方法。 【实验原理】 心脏的功能在于泵血，它的机能状态可用心率、压力、流量、功率等来描述。 在心泵功能的研究中，往往将两种不同力学特性的信息展现在两维平面上，以表达心泵功能所处的状态，称为心泵功能的“双信息图”显示法，即Lissajous图显示法。 本实验记录左心室内压（LVP），并求得心室内压的变化率（dP/dt）。程序自动判别心动周期，进而运用“双 ...

【实验目的】 观察组胺对小肠收缩的影响，测定苯海拉明的拮抗参数PA2值。 【实验原理】 组胺（histamine）可局部作用于H1受体，引起胃、肠道、气管、支气管平滑肌收缩。H1受体阻断药苯海拉明（diphenhydramine）对组胺具有竞争性拮抗作用，其作用强度可用拮抗参数（PA2值）来反映。当激动药与拮抗药合用时，拮抗药使两倍浓度的激动药仅产生原浓度激动药的反应水平，此时该拮抗药的摩尔浓度的负对数值为PA2值。本实验通过测 ...

【实验目的】 1． 了解膜片钳技术的基本原理及记录方法。 2． 观察记录大鼠海马神经细胞单通道钠电流及全细胞钠通道电流。 【实验原理】 钠通道在多种细胞尤其是在神经、肌肉等可兴奋细胞中广泛存在。钠电流（ⅠNa）是快反应细胞上最重要的除极离子流，与细胞的兴奋性密切相关。钠通道在膜电位-70～-65 mV开始激活，产生一迅速激活并迅速失活的内向电流，最大电流峰值在膜电位-40 ～-30 mV，反转电位为+30 mV左右。在参数设计上应使膜电位钳制在-80 mV以下，此 ...

【实验目的】 1. 掌握药物半数致死量的概念、测定。 2. 了解急性毒性实验。 【实验原理】 药物半数致死量LD50是指药物急性毒性实验中，当动物死亡率为50%时的单次给药剂量，单位通常为mg/kg。例如，当某药物给予400mg剂量时，可致使一半家兔（体重约为4kg）死亡，则其LD50值为100mg/kg。LD50值通常反映药物急性毒性的大小。药物的急性毒性、慢性毒性实验同属于一般毒理学的研究范畴。此外，药物毒理学研究尚包括特殊毒理学（致癌、致畸 ...

一、蟾蜍心活动起搏点的观察 【实验目的】 1. 学习蟾蜍心脏的暴露方法，熟悉其表面结构。 2. 观察心脏不同部位的活动规律及相互关系，确定蟾蜍心活动的起搏点。 【实验原理】 心脏的特殊传导系统具有自动节律性（autorhythmicity），但各部分的自律性高低不同，两栖类动物以静脉窦的自律性最高（哺乳类动物以窦房结的自律性为最高）。正常心脏每次兴奋都从自律性最高的部位开始，依次传到心房、心室，相继引起心房、心室收缩。把自动节律性最高的部位称为 ...

一、电刺激的强度和频率与骨骼肌收缩反应的关系 【实验目的】 1. 观察刺激强度与肌肉收缩张力之间的关系。 2. 观察刺激频率与肌肉收缩形式之间的关系。 【实验原理】 肌肉、神经和腺体组织称为可兴奋组织，其兴奋性较大，且不同组织、细胞的兴奋表现亦不相同，肌肉组织的兴奋主要表现为收缩活动。刺激（stimulation）要使可兴奋组织发生兴奋，就必须达到一定的刺激量，即刺激强度、刺激时间和强度-时间变化率必须达到一定的值。通过固定后两个条件，改变刺激 ...