药物半数致死量LD50的测定

【实验目的】

1. 掌握药物半数致死量的概念、测定。

2. 了解急性毒性实验。

【实验原理】

药物半数致死量LD50是指药物急性毒性实验中，当动物死亡率为50%时的单次给药剂量，单位通常为mg/kg。例如，当某药物给予400mg剂量时，可致使一半家兔（体重约为4kg）死亡，则其LD50值为100mg/kg。LD50值通常反映药物急性毒性的大小。药物的急性毒性、慢性毒性实验同属于一般毒理学的研究范畴。此外，药物毒理学研究尚包括特殊毒理学（致癌、致畸、致突变）、药物依赖性及过敏反应实验等。各种属动物均可用于药物LD50值的测定，通常使用啮齿类动物（大鼠和小鼠），有时使用家兔和犬。

巴比妥类（barbiturate）药物可抑制中枢神经系统，引起镇静、催眠、抗惊厥及麻醉作用，当剂量过大时可使生命中枢麻痹，最终导致死亡。本实验通过学习测定戊巴比妥钠的LD50值，介绍了药物急性毒性的研究方法。

【实验对象】

小鼠（昆明种），体重20g左右，雌雄各半。

【试剂与器材】

3%戊巴比妥钠溶液，生理盐水，苦味酸溶液；量筒，烧杯，注射器，天平。

【实验方法与步骤】

1. 预实验   随机将小鼠分为4~5组，每组3~4只。配制3%戊巴比妥钠原液，可进一步稀释为不同浓度药液。小鼠腹腔注射给药，各组给药剂量按照等比数列递减。记录每组动物的死亡率。目的在于找到并确定造成0%与100%动物死亡的剂量范围。

2. 正式实验

（1）先将小鼠雌雄分开，逐一称重。雌、雄小鼠分别按照体重由小到大（或由大到小）排序。然后按照分层随机原则将小鼠分为5～7组，每组10只。

（2）根据预实验中造成0%与100%动物死亡的剂量范围，在其间设计5～7个不同剂量组，使剂量按照等比数列递减。给药后观察并记录动物的死亡时间和数目。连续观察7～14天。按照简化概率法、改进寇氏法、Bliss法（详见参考书目）计算LD50值及其95%可信区间。

（3）计其方法（寇氏法）：

 

【注意事项】

 

1. 正式实验中，根据预实验中0%与100%动物死亡的剂量范围，按照等比数列设计5～7个不同剂量组，公比一般取1: 0.8 ～ 1: 0.7。

2. LD50值计算方法很多，其中Bliss法亦称作加权几率单位法或几率单位正规法，是目前新药审批中规定使用的方法。现可通过统计软件计算完成，如中国药理学会数学药理专业委员会编制的药效学统计软件。

3. 若同时测定药物的LD50值及ED50值（半数有效剂量），可计算药物治疗指数TI（therapeutic index），即TI= ED50/LD50。通常来说，药物治疗指数越大，则越安全。

  　思 考 题

1. 举例说明测定药物半数致死量LD50值，对于指导临床用药具有哪些意义？

2. 药物LD50值计算方法如简化概率法、改进寇氏法、Bliss法等，其各自优缺点如何？