常规切片的制作过程

【实验目的】

1. 了解常规切片的制作过程。

2. 熟悉苏木素－伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色方法。

【实验原理】

将各种方法（活检、尸检）获取的组织标本经过一定的步骤处理，做成切片。苏木素是碱性染料，可将细胞核（嗜碱性物质）染成蓝色，伊红是酸性染料，可将多数细胞的细胞质（嗜酸性物质）染成红色，形成色彩鲜艳、结构清晰的组织图像。

【实验对象】　

尸检来源的正常肺组织。

【实验药品与器材】

1. 器材　手术刀、恒温箱、石蜡切片机、显微镜。

2. 试剂　10％福尔马林，梯度酒精(70％、80％、90％、95％)，无水酒精，二甲苯，包埋石蜡，苏木素染液，伊红染液。

【实验方法与步骤】

1. 取材和固定　用锋锐的手术刀细致而迅速地取下一块大小适宜(1.5×1.5×0.2 cm)的肺组织块，立即投入10％福尔马林内固定24 h，也可多放一段时间待用时取出（最好不要超过48h）。

2. 脱水　依次经过70％(2 h)、80％(2 h)、90％(2 h)、95％酒精(Ⅰ、Ⅱ 各2 h)和无水酒精(Ⅰ、Ⅱ各1 h)脱水，二甲苯透明(Ⅰ、Ⅱ 各1 h)，以置换组织内的酒精溶液。

3. 包埋　将透明好的组织块置入已在温箱(58℃～60℃)内熔化的石蜡内(Ⅰ、Ⅱ 各2 h)，使石蜡浸入组织并替换出二甲苯。在包埋器的内壁涂一层甘油，倾入熔化的石蜡，将浸透蜡的组织块放入包埋器（待切面朝下），摆好间距和方位，待蜡液表面凝固后，将包埋器投入冷水浴中，使石蜡冷却凝固。

4. 切片　将蜡块固定于切片机，切成5μm厚的切片，在45℃的水面上展平后捞在涂有防脱剂的载玻片上，置60℃烤箱2h。

5. 脱蜡　二甲苯脱蜡（Ⅰ、Ⅱ 各15min)，不同浓度酒精（100％、95％、80％、70％）置换二甲苯并经蒸馏水水化后即可进行染色。

6. 苏木精－伊红染色　将经处理的组织切片置苏木素染液中染5min，自来水冲洗，稀盐酸分化后，置流水中充分冲洗返蓝；伊红染液染色2～3min，流水冲洗干净。

7. 脱水、透明和封固　染好的切片经梯度酒精脱水（70％、80％、95％、100％）各5min，二甲苯透明（Ⅰ、Ⅱ 各5 min)，在载玻片上加一滴中性树胶，然后覆盖一片清洁的盖玻片。

8. 显微镜观察。

【注意事项】

1. 每取完一例标本后，所有的工具如刀、剪、盘、镊、切板等，必须用水冲洗干净，以免污染。

2. 尽量保持组织的原有形态，勿使组织块受挤压，切取标本的大小不超过2.0 cm×2.0 cm×0.2 cm。

3． 依据组织块大小确定脱水、透明和浸蜡时间。时间过长，组织块过硬、变脆；时间不够，则组织块硬度不够，且HE染色时核浆蓝染，界限不清，不利于观察。

4. 苏木素染后应充分返蓝，使细胞色彩鲜明，结构清晰。