石蜡切片的制作及HE染色
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实验原理
1、利用光学显微镜对生物样品进行观察，需要样品必需要一定的厚度范围内，才能保证光线的透过性。
2、由于生物样品多为软性材料，所以必需将其包埋在一定的固体支持物中，常用的支持物有石蜡、火棉胶等。其中石蜡切片是最常用的光镜样品制片技术。
3、苏木素（Hematoxylin）与伊红（Eosin）对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的方法。这种方法染色广泛，对组织细胞的各种成份都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
实验用品
1、实验器材：恒温箱、切片机、解剖器械、载玻片、酒精灯、染色缸和烧杯等。
2、实验 试剂 ：
Carnoy固定液；二甲苯；各级浓度的酒精溶液；Ehrlich苏木精染液；伊红染液
3、实验材料：小鼠小肠或肝组织
方法与步骤
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石蜡切片样本的制作
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实验步骤
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注意事项
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1、断头处死小鼠，剖开腹腔，取出一部分肝组织，生理盐水冲洗，并将其修切成小块，加入固定液进行固定，各级酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。
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2、材料上切片机切片，用 蒸馏 水将切片贴于干净无油的玻片上，在酒精灯上略烤，使切片展平，将贴好的片子于室温老化3—7天后，即可用于染色。
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石蜡切片的HE染色
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实验步骤
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注意事项
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3、切片脱蜡至水用于染色：切片入二级二甲苯各15min，再入100%乙醇（二级）→95%乙醇→75%乙醇→50%乙醇→ 蒸馏 水中各3～5 min。
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4、染色
（1）切片入苏木色精中染色约10～30 min，
用自来水流水冲洗约15 min。冲洗过程中使切片颜色发蓝。
（2）分化：就是将细胞质着的色褪去，使细胞核着色更加鲜明，也称分色。将切片放入1%盐酸酒精液（盐酸1份＋70％乙醇100份）中褪色，见切片变红，颜色较浅时即可，约数秒至数十秒钟。
（3）复染：用0.5%伊红酒精液（伊红0.5 g ＋ 95％乙醇100 ml）对比染色2～5 min。
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1、染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低，适当缩短或延长。室温高时促进染色，染色时间可短些，否则可适当延长时间，冬季室温低时可放入 恒温箱 中染色。
2、蓝化时入碱性水也可，但用促蓝剂对伊红可能拒染，如果时间来得及，应以流水冲洗使切片显示蓝色为宜，但要注意流水不能过大，以防切片脱落，并随时用显微镜检查见颜色变蓝为止。
3、分化是H.E.染色成败的关键，如分化不当会导致染色不匀、或深或浅，得到的切片染色效果差。如果染色适中，可取消此步骤。
4、 伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木色精染细胞核的浓淡相配合，如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡染。可在伊红酒精液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。
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