求问 脂肪组织石蜡切片HE染色步骤

切好片捞片的时候贴平整，烤片时间一定要够，还有就是如果是间隔一段时间再做染色的一定要二次烤片。

石蜡切片HE染色(常规HE染色)步骤：

　　(1)二甲苯Ⅰ：5～10min;

　　(2)二甲苯Ⅱ：5～10min;

　　(3)无水乙醇Ⅰ：1～3min;

　　(4)无水乙醇Ⅱ：1～3min;

　　(5)95%乙醇Ⅰ：1～3min;

　　(6)95%乙醇Ⅱ：1～3min;

　　(7)80%乙醇：1min;

　　(8)蒸馏水：1min;

　　(9)苏木精液染色：5～10min;

　　(10)流水洗去苏木精液：1min;

　　(11)1%盐酸-乙醇：1～3s;

　　(12)稍水洗：1～2s;

　　(13)返蓝(用温水或1%氨水等)：5～10s;

　　(14)流水冲洗：1～2min;

　　(15)蒸馏水洗：1～2min;

　　(16)0.5%伊红液染色：1～3min;

　　(17)蒸馏水稍洗：1～2s;

　　(18)80%乙醇：1～2s;

　　(19)95%乙醇Ⅰ：2～3min;

　　(20)95%乙醇Ⅱ：2～3min;

　　(21)无水乙醇Ⅰ：3～5min;

　　(22)无水乙醇Ⅱ：3～5min;

　　(23)石炭酸-二甲苯：3～5min;

　　(24)二甲苯Ⅰ：3～5min;

　　(25)二甲苯Ⅱ：3～5min;

　　(26)二甲苯Ⅲ：3～5min;

　　(27)中性树胶封固。

骤一：取材与固定：

取动物新鲜组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。

步骤二：脱水透明：

一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。

步骤三：浸蜡包埋：

将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。

步骤四：切片与贴片：

将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。

步骤五：脱蜡

常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。

步骤六：染色

HE染色过程是：

①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。

②酸水及氨水中分色，各数秒钟。

③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

④入70％和90％酒精中脱水各10分钟。

⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

步骤七：脱水透明：

染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。

步骤八：封固：

将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。待树胶略干后，贴上标笺，切片标本就可使用。