石蜡切片和HE染色常见问和处理方法及体会
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1. 1 原因
(1) 脱蜡时间不足或二甲苯由于使用过久,浓度降低,致使组织切片内蜡未彻底脱净. (2) 取材时部份组织受挤压或取材后未及时固定. (3) 浸蜡时温度过高,超过68 ℃. (4) 切片组织内有水分. (5) 盖玻片和载玻片不清洁.
1. 2 处理方法
(1) 脱蜡的二甲苯要定期更换,脱蜡时间宁长勿短;在冬季,特别是室温在20 ℃以下时,染色前首先将切片放置温箱中预热,使切片上石蜡熔化,再投入二甲苯中脱蜡,或将二甲苯稍加温后再脱蜡〔1〕. (2) 取材时切勿挤压组织,取材后立即固定. (3) 浸蜡时温度必须控制在62 ℃～64 ℃. (4) 脱水酒精定期更换,严格密封,防止水分吸入而降低无水酒精的浓度,造成脱水不佳,且封片速度要快. (5) 载玻片和盖玻片必须清洗干净.
2 染色过程中出现切片脱落
2. 1 原因
(1) 附贴蜡片未及时烘烤或烤片时间不足. (2) 附贴切片不平. (3) 苏木精反蓝的氨水浓度过高. (4) 洗片时水流过急. (5) 脱蜡二甲苯过凉. (6) 切片过厚. (7) 组织固定、脱水、透明浸蜡等任一过程欠佳. (8) 载玻片有油污等. (9) 有特殊的组织.
2. 2 处理方法
(1) 附贴蜡片立即放入烤箱内,在室内不要放置过久;烤片时间控制在20～30 分钟〔2〕. (2) 附贴时将蜡片充分展平,避免气泡遗留在蜡片和载玻片之间. (3) 反蓝的氨水浓度控制在1 ‰以下. (4) 不要用流入盛切片容器内的自来水直接冲刷载玻片. (5) 室温过低时,脱蜡之前将二甲苯加温. (6) 切片要尽量薄,厚度掌握在3～5μm 之间. 切片厚不但易脱落,而且细胞重叠,也影响观察诊断. (7) 组织固定、脱水、透明浸蜡等任一过程都要掌握好时间. (8) 载玻片一定要洁净.
3 切片不平、有皱褶
3. 1 原因
(1) 切片刀不锋利. (2) 展片时蜡片粗糙面接触水. (3) 展片的水温过高. (4) 蜡块的左右两边蜡边较宽.
3. 2 处理方法
(1) 切片刀一定要锋利,否则组织不易展平,尤其是较难切的骨及脂肪组织. (2) 展片时将靠刀面的蜡片接触水面以利于展平切片. (3) 展片水的温度,调控在38 ℃～41 ℃之间为宜. 水过热使蜡熔解,使之无法展平. 特别是做骨组织和脂肪组织切片时,水温应先低再逐渐升温. (4) 蜡块左右两边的蜡边要尽量贴近组织,而上下蜡边留的要宽一些,否则在水中容易断片及无法展平蜡片
4 细胞核和细胞浆染色对比不明显
4. 1 原因
(1) 甲醛液中固定时间过长. (2) 切片过厚. (3) 组织固定不佳. (4) 苏木精和伊红染色分化不良.
4. 2 处理方法
(1) 固定液甲醛易氧化成甲酸,使细胞核在酸性液体的作用下不易着色,而细胞浆酸性增加后伊红染色加深,所以在备用的甲醛溶液中加入少量的碳酸镁或碳酸钠来做中和剂,以防止染色不良〔3〕. (2) 切片厚度控制在3～5μm. (3) 组织充分固定. (4) 苏木精盐酸酒精的分化要适当,使细胞浆多余的颜色分化掉;伊红染色后的脱水要充分,低浓度酒精脱水时间过短,使细胞核有伊红染料沉着,多数出现核着色不佳,伊红着色过深.综上所述,要想做出一张高质量的组织切片,作为一名技术人员,首先掌握石蜡切片HE 染色的机制及操作过程,其次要有高度的责任感及同情心. 一张切片的好坏,直接影响到教学效果、科研的最终成果及对患者的诊治. 石蜡切片HE 染色虽然操作过程繁琐复杂,只要做到一丝不苟,精益求精,就能避免以上问题的出现,作出优质的石蜡切片.
此文转载于《内蒙古民族大学学报(自然科学版)》2004 年8 月
作者：黄亚凤,强 欣,王玉荣
(1) 脱蜡时间不足或二甲苯由于使用过久,浓度降低,致使组织切片内蜡未彻底脱净. (2) 取材时部份组织受挤压或取材后未及时固定. (3) 浸蜡时温度过高,超过68 ℃. (4) 切片组织内有水分. (5) 盖玻片和载玻片不清洁.
1. 2 处理方法
(1) 脱蜡的二甲苯要定期更换,脱蜡时间宁长勿短;在冬季,特别是室温在20 ℃以下时,染色前首先将切片放置温箱中预热,使切片上石蜡熔化,再投入二甲苯中脱蜡,或将二甲苯稍加温后再脱蜡〔1〕. (2) 取材时切勿挤压组织,取材后立即固定. (3) 浸蜡时温度必须控制在62 ℃～64 ℃. (4) 脱水酒精定期更换,严格密封,防止水分吸入而降低无水酒精的浓度,造成脱水不佳,且封片速度要快. (5) 载玻片和盖玻片必须清洗干净.
2 染色过程中出现切片脱落
2. 1 原因
(1) 附贴蜡片未及时烘烤或烤片时间不足. (2) 附贴切片不平. (3) 苏木精反蓝的氨水浓度过高. (4) 洗片时水流过急. (5) 脱蜡二甲苯过凉. (6) 切片过厚. (7) 组织固定、脱水、透明浸蜡等任一过程欠佳. (8) 载玻片有油污等. (9) 有特殊的组织.
2. 2 处理方法
(1) 附贴蜡片立即放入烤箱内,在室内不要放置过久;烤片时间控制在20～30 分钟〔2〕. (2) 附贴时将蜡片充分展平,避免气泡遗留在蜡片和载玻片之间. (3) 反蓝的氨水浓度控制在1 ‰以下. (4) 不要用流入盛切片容器内的自来水直接冲刷载玻片. (5) 室温过低时,脱蜡之前将二甲苯加温. (6) 切片要尽量薄,厚度掌握在3～5μm 之间. 切片厚不但易脱落,而且细胞重叠,也影响观察诊断. (7) 组织固定、脱水、透明浸蜡等任一过程都要掌握好时间. (8) 载玻片一定要洁净.
3 切片不平、有皱褶
3. 1 原因
(1) 切片刀不锋利. (2) 展片时蜡片粗糙面接触水. (3) 展片的水温过高. (4) 蜡块的左右两边蜡边较宽.
3. 2 处理方法
(1) 切片刀一定要锋利,否则组织不易展平,尤其是较难切的骨及脂肪组织. (2) 展片时将靠刀面的蜡片接触水面以利于展平切片. (3) 展片水的温度,调控在38 ℃～41 ℃之间为宜. 水过热使蜡熔解,使之无法展平. 特别是做骨组织和脂肪组织切片时,水温应先低再逐渐升温. (4) 蜡块左右两边的蜡边要尽量贴近组织,而上下蜡边留的要宽一些,否则在水中容易断片及无法展平蜡片
4 细胞核和细胞浆染色对比不明显
4. 1 原因
(1) 甲醛液中固定时间过长. (2) 切片过厚. (3) 组织固定不佳. (4) 苏木精和伊红染色分化不良.
4. 2 处理方法
(1) 固定液甲醛易氧化成甲酸,使细胞核在酸性液体的作用下不易着色,而细胞浆酸性增加后伊红染色加深,所以在备用的甲醛溶液中加入少量的碳酸镁或碳酸钠来做中和剂,以防止染色不良〔3〕. (2) 切片厚度控制在3～5μm. (3) 组织充分固定. (4) 苏木精盐酸酒精的分化要适当,使细胞浆多余的颜色分化掉;伊红染色后的脱水要充分,低浓度酒精脱水时间过短,使细胞核有伊红染料沉着,多数出现核着色不佳,伊红着色过深.综上所述,要想做出一张高质量的组织切片,作为一名技术人员,首先掌握石蜡切片HE 染色的机制及操作过程,其次要有高度的责任感及同情心. 一张切片的好坏,直接影响到教学效果、科研的最终成果及对患者的诊治. 石蜡切片HE 染色虽然操作过程繁琐复杂,只要做到一丝不苟,精益求精,就能避免以上问题的出现,作出优质的石蜡切片.
此文转载于《内蒙古民族大学学报(自然科学版)》2004 年8 月
作者：黄亚凤,强 欣,王玉荣
