苯海拉明对组胺的竞争性拮抗作用（PA2值的测定）

【实验目的】

观察组胺对小肠收缩的影响，测定苯海拉明的拮抗参数PA2值。

【实验原理】

组胺（histamine）可局部作用于H1受体，引起胃、肠道、气管、支气管平滑肌收缩。H1受体阻断药苯海拉明（diphenhydramine）对组胺具有竞争性拮抗作用，其作用强度可用拮抗参数（PA2值）来反映。当激动药与拮抗药合用时，拮抗药使两倍浓度的激动药仅产生原浓度激动药的反应水平，此时该拮抗药的摩尔浓度的负对数值为PA2值。本实验通过测定苯海拉明对组胺的拮抗参数PA2值，介绍了如何评价拮抗药的作用强度。

【实验对象】

豚鼠，体重300g左右，雌雄均可。

【试剂与器材】

磷酸组胺溶液10-7mol/L，10-6mol/L，10-5mol/L，10-4mol/L，10-3mol/L，10-2mol/L，10-1mol/L；苯海拉明溶液10-5mol/L，5×10-5mol/L，10-4mol/L；台氏液（Tyrode's solution）；BL-420微机型生物机能实验系统，恒温水浴箱，麦氏浴槽，张力换能器，手术器械，铁架台，培养皿，注射器。

【实验方法与步骤】

1. 制备肠段　取豚鼠一只，击头处死，迅速剖腹，取出回肠，放入盛有台式液的培养皿中。用注射器吸取台式液，冲洗肠管至少三遍，将肠内容物清除。剪成约2cm长肠段备用。

2. 组胺的小肠收缩作用　将肠段两端结扎，一端固定在浴槽中，另一端固定于换能器上。浴槽中加入15ml台式液，恒温在37±0.5℃，通入氧气。待肠段稳定10min后，记录一段基线。然后加入不同浓度组胺溶液（表23-1）。每次加完后，待肠管张力不再增加，方可加入下一次组胺溶液。记录收缩曲线。

3. 苯海拉明的拮抗作用　用台式液冲洗浴槽三次，浴槽内溶液仍为15ml，加入10-5 mol/L苯海拉明0.2ml，待肠管稳定5min后，依上述方法加入不同浓度组胺溶液，记录收缩曲线。再次冲洗浴槽，加入5×10-5mol/L苯海拉明0.2ml，待肠管稳定5min，依上述方法加入不同浓度组胺溶液，记录收缩曲线。与上述类似，冲洗浴槽后，加入10-4 mol/L苯海拉明0.2ml，记录收缩曲线。

4. 计算PA2值　可利用BL-420微机型生物机能实验系统计算，亦可使用三点法、Scott比值法进行计算（详见参考书目）。

（1）先测量组胞各累积浓度的收缩反应强度，然后以效能为百分之百计算

（2）求出各浓度的反应百分率，以组胺终浓度为横坐标，反应百分率为纵坐标在微机或坐标纸上给出量曲线，从量曲线上分别求出拮抗剂前后激动剂引起50%反应所需约剂量（ED50），代入公式计算PA2值。

PA2=log（E′/E-1）-logB

E′：有拮抗剂时激动剂的ED50；

E：无拮抗时激动剂的ED50；

B：拮抗剂的摩尔浓度。

【注意事项】

1. 制备肠段时，注意操作规范，尽量避免损伤，以免影响后续收缩功能的测定。

2. 加入药量必须准确，药液可以直接加在浴槽内溶液的液面上。

  　思 考 题

1. 试述竞争性拮抗剂与非竞争性拮抗剂的区别。