托品对乙酰胆碱的竞争性拮抗作用及PA2值测定
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托品对乙酰胆碱的竞争性拮抗作用及PA2 值测定
实验目的
1 ．掌握 PA2 值的测定方法及其意义
2 ．观察阿托品对乙酰胆碱的竞争性拮抗作用
教学时数 2 学时
实验原理
1、 激动药与拮抗药
（1） 激动药 (agonist) ：与受体有亲和力又有内在活性药物。
完全激动药 (full agonist): α= 1
部分激动药 (partial agonist, mixed agonist): 与受体有亲和力，但内在活性较弱
（ α<1 ）的药物。
（ 2 ） 拮抗药 (antagonist) ：与受体有亲和力，而无内在活性的药物（ α= 0 ）。
①竞争性拮抗药 (competitive antagonist) 与激动药竞争同一受体的拮抗药。
激动药的量效反应曲线可以被竞争性拮抗药平行右移。如果增加竞争性激动药浓度，仍可达到 Emax 。
②非竞争性拮抗药（ noncompetitive antagonist ） 与激动剂作用于同一受体，结合牢固，分解慢或是不可逆的，或作用于相互关联的不同受体。
2 、 PA2 值
PA2 是一种用以表示竞争性拮抗剂作用强度的指标，其意义是能使激动剂提高到原来的 2 倍时，可产生与原来浓度相同效应所需的拮抗剂克分子浓度的负对数 (-log(B)) 。 PA2 的值越大说明拮抗剂的作用越强。 pA2 是拮抗参数 (antagonism parameter) ：当有一定浓度的拮抗药存在时，激动剂增加 2 倍时才能达到原来效应，此时拮抗药的负对数即拮抗参数， pA2 = -log[I] = -logKI
3 、药物作用
乙酰胆碱作用于豚鼠回肠的 M 受体，引起肠肌收缩，当加入 M 受体拮抗剂阿托品后，若提高乙酰胆碱浓度，仍能达到未加拮抗剂前的最大反应，并可使剂量反应曲线平行右移，则表明阿托品对乙酰胆碱呈竞争性拮抗。
实验材料
1 ．动物：豚鼠
2 ．器材： RM6240 多媒体化生物信号记录分析系统、 PC80586 计算机、张力传感器、保温式麦氏浴槽、超级恒温水浴、“ L ”型通气钩、高位吊瓶、量筒、烧杯、培养器、氧气瓶、外科剪刀、眼科剪刀、眼科镊子、缝衣针、棉线、注射器、台式营养器。
3 ．药物：① 3 × 10-4 M Atropine
② 3X10-6 ― 3X10-2 M Ach
实验方法
一、首先调试 RM6240 系统，使进入肌张力测定状态．
1 ．在主菜单中用鼠标选择 < 实验 > 中的 < 消化 > ，选择系统显示 < 平滑肌生理特性 > 。
2 ．在界面右侧控制参数区选择 < 张力 >, 〈选择 3g 〉 , 扫描速度 1.0s/div, 确定信号输入，选择〈通道 2 〉，在工具菜单选择快速归零（空载时钩上无任何东西）。
3 ．在主菜单中选择〈示波〉，进入示波状态。
4 ．在主菜单中工具栏选择〈网格切换〉对背景网格进行切换为细格，并在选项中选择波形颜色红色。
此时肌张力测试调试完毕。
二、调节仪器：麦氏浴槽中加 50ml 台氏液，调节温度 38 ℃± 0 ． 5 ℃
氧气 2--3 个气泡／秒，并制备豚鼠回肠标本。
三、正式实验：
将肠管标本两端用缝衣针各穿一线，一端打一空结 ( 约 lcm 小套 ) ，另一端穿上长线打结，用眼科镊钳住空结固定于通气钩上，放入麦氏浴槽中，将另端长线的尽端打一空结，挂在张力换能器的小钩上，调节换能器高度，使前负荷为 1g( 可从标尺上看出来 ) ，稳定标本 20 分钟。
在主菜单下按键选择〈记录状态〉，先描记一段正常曲线，然后按下列顺序给药。
向麦氏浴槽中加入 3X10-3 M Ach0 ． 1ml ，观察曲线变化，检查肠管是否有兴奋作用，然后冲洗肠管，使其恢复至正常。
按表格所给的剂量累积加乙酰胆碱，制作乙酰胆碱的累积量效曲线。具体作法：先加小剂量 Ach ，若有反应则当反应达最高峰时立即加下一剂量 Ach ，在每加一次药时都需用标记，只标加药序号，不打药名，直至曲线上升至最高峰不再升高为止。将系统转入“示波状态”，用台氏液冲洗肠管 3 遍，稳定标本 15 分钟，使恢复至正常。
在主菜单下选择〈记录状态〉，向浴槽中加 3X10-3 M Atropine 0.1ml ，并标记药名，过 1 分钟后再一次制作 Ach 的累积浓度量效曲线。
在主菜单下选择“结束实验”。激活工具栏，系统进入分析状态。
实验结果处理
1、 在主菜单下分析项可选择区域测量、标记查询、开始反演、鼠标捕捉，测量后按工具栏中取消标志线，分别测出正常曲线及每次加药后的张力大小，最后以乙酰胆碱引起最大收缩力为 100 ％，分别计算各剂量反应的百分率
2、 再以各剂量反应的百分率为纵坐标，以剂量的负对数为横坐标，绘出剂量反应曲线。
3、 再根据公式求出 PA2 值。
PA2 =-log C
[B] -1
[A]
A ：在无阿托品时，引起最大反应的 50% 时所需乙酰胆碱的浓度。
B ：在阿托品存在下，引起最大反应的 50% 时所需乙酰胆碱的浓度。
C ：为拮抗剂阿托品的浓度。
表 1
|
No
|
Preparation of Ach(M)
|
volumeml ／ 30ml
|
Concentration of Ach
In magunus tube(M)
|
|
1
|
3 x10-6
|
0.1
|
10-8
|
|
2
|
3 x10-6
|
0.2
|
3 x 10-8
|
|
3
|
3 x10-5
|
0.07
|
10-7
|
|
4
|
3 x10-5
|
0.2
|
3x 10-7
|
|
5
|
3 x10-4
|
0.07
|
10-6
|
|
6
|
3 x10-4
|
0.2
|
3 x 10-6
|
|
7
|
3 x10-3
|
0.07
|
10-5
|
|
8
|
3 x10-3
|
0.2
|
3 x 10-5
|
|
9
|
3 x10-2
|
0.07
|
10-4
|
|
10
|
3 x10-2
|
0.2
|
3 x 10-4
|
