病毒感染细胞 MOI 值摸索

MOI: 复感染指数，是指病毒对细胞的感染能力，MOI 越高，细胞越难被感染。通常把某株细胞有 80% 被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的 MOI。

MOI=（病毒滴度 × 病毒体积）/ 细胞数目

通过感染预实验确定慢病毒对细胞的感染 MOI 和最佳感染条件，如接种细胞量，感染试剂，感染后换液时间，这些将为正式实验提供参考。

【材料试剂】胎牛血清、基础培养基、HitransG A、HitransG P、胰酶

【仪器用品】荧光显微镜、CO₂ 培养箱、倒置显微镜、离心机、生物安全柜

1. 为了确认合适的感染条件，按照不同培养条件将实验分为 4 组：

A 组：常规培养基组，观察常规培养条件下病毒对细胞的感染效果；

B 组：添加 HitransG A（简称 A 液）的常规培养基组，观察 HitransG A 是否可以提升感染效果；

C 组：添加 HitransG P（简称 P 液）的常规培养基组，观察 HitransG P 是否可以提升感染效果；

Control 组：监控实验过程中细胞生长是否正常。

注：HitransG A（25X，简称 A 液） HitransG P（25X，简称 P 液）

1. 贴壁细胞的感染

(1) 保证细胞的良好生长状态，实验前一天制备密度为 3~5×10⁴ 个/ml 细胞悬液，接种 100 μL 细胞悬液于 96 孔板中。预感染时共需 13 个孔，一般不使用边缘孔。不同种类的细胞生长速度有所差异，为保证较好的实验结果，进行慢病毒感染时细胞的融合率应为 20%-40%。

(2) 感染预实验共设置三组感染条件，每组均设置四个不同梯度 MOI。用目的细胞培养基 Normal（不含血清）将慢病毒梯度稀释成 1×10⁸ TU/mL、5×10⁷ TU/mL 、1×10⁷TU/mL、1×10⁶TU/mL 4 个组，各 50 µL，对应不同梯度的 MOI。

(3) 吸掉上清液，并按照表 1 向各孔中加入相应体积的溶液，混匀，继续培养。此时，1-4 组加入的病毒量分别为 1×10⁶ TU、5×10⁵ TU 、1×10⁵ TU、1×10⁴ TU，细胞数目大约为 1×10⁴个，

所以 1-3 组的 MOI 分别为100、50、10、1。

表 1. 感染预实验分组和感染条件

(4) 感染 16 h 后换回常规培养基，观察细胞形态，发生变化时可以提前到 8 h 换液，保持细胞正常生长。

(5) 感染约 72 h，显微镜观察荧光表达情况。感染效率 80% 左右，且细胞生长良好的组所对应的感染条件和 MOI 即可以作为后续感染实验的依据。

1. 悬浮细胞的感染

(1) 实验前保证细胞处于良好的生长状态，将目的细胞收集后离心，去掉上清液，用完全培养基将细胞稀释成 1~2×10⁵ 个/ml，各 1 mL。取完全培养基稀释的细胞悬液 86 µL/孔加入 96 孔板中，接 13 个孔。

(2) 病毒的稀释过程同贴壁细胞。

(3) 按表 2，将病毒稀释液加入细胞悬液中，混匀，继续培养。

表 2. 悬浮细胞慢病毒感染预实验分组

(4) 8-16 h 以后观察细胞状态，补加 100 μL 新鲜培养基重悬培养。

(5) 感染约72 h，显微镜观察荧光表达情况。感染效率80%左右，且细胞生长良好的组所对应的感染条件和MOI即可以作为后续感染实验的依据。

(1）选择感染效率80%左右的作为最佳感染条件。

(2）在细胞形态丌受影响的情况下尽可能用少的病毒感染细胞。

(3）感染效率及细胞状态相当的情况下尽量选择常规培养基进行感染。