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细胞培养

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问准备养原代脂肪细胞，请问在培养，传代，铺板及诱导分化原代脂肪细胞有什么需要注意和小心的点，应该采取哪些措施防止，谢谢！

sswei

传代培养的注意事项1）离体培养的细胞生命力比较脆弱，因此传代时细胞没有生长到培养瓶底壁面积的 80%以前，不要急于传代。2）首次传代，由于原代培养中各种类型的细胞常混杂生长，传代时不同细胞又不同的消化时间，因而要根据需要注意及时处理。3）对贴壁细胞消化后的吹打过程要有序进行，要从一边开始到另一边结束，尤其是器皿的四角处，确保瓶皿底壁各处的细胞都被吹打脱离。吹打时动作不宜过猛，吹出液体的力度要

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问鼠来源的神经干细胞该如何提取原代细胞及培养好呢？

loveliufudan

具体步骤：新生鼠使用眼科剪将动物断头，并用镊子剥除头部的皮肤。在冰D-PBS液中沿颅骨人字缝从后向前剥离。一般左手持弯镊，在动物两眼处以适当力度固定；右手持直镊，完成剥除皮肤、骨骼以及分离组织等工作。在显微镜下利用精细器械分离皮层或海马时，沿皮层边缘以45°角小心划开，并逐步使之剥离，转移组织入盛有冰D-PBS液的35mm小皿中；然后用精细器械仔细去除每个皮层或海马的脑膜（整个过程需要在低温冰袋上

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问细胞培养废液负压吸引器如何消毒

whilt-shirt

一般是用八四消毒液清洗后照紫外，清洗频率是满了就洗

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问人肺泡巨噬细胞提取与培养

__miraitowa__

求分享从肺泡灌洗液中提取巨噬细胞的经验

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问原代细胞培养的相关注意事项

未来9

1)原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时，它们之间会互相影响，在这些细胞之间能产生一些促生长的活性物质，使细胞彼此互相促进存活和生长。如果接种的细胞密度过低，细胞之间的促生长作用很小，也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入独立生存环境的变化过程。如果接种的细胞密度过大，会导致营养物质供应不足，代谢废物积累较快需要经常换液和传代。　　2）适当增大原代培养接种的细胞密度，给培养的细胞提供更

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问NS0细胞培养

龙大人驾到

如果NSO细胞系一直无法培养成功，可能需要检查以下几个方面：1. 培养条件是否正确：包括温度、CO2浓度、培养液配方和pH值等。确保所有条件都符合NSO细胞系的生长要求。2. 细胞培养技术：NSO细胞系很敏感，需要专业的细胞培养技术，包括细胞解冻、传代、分离、传染等等。确保操作过程中无菌且温和。3. 起始细胞质量：NSO细胞系对起始细胞的质量要求比较高，起始细胞应该是健康的、纯度高的。4. 检测污

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问求助：cal27细胞培养问题

土井挞克树

你可以降低细胞密度试一下，目前来说确实漂浮的有点多

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问小鼠子宫内膜上皮细胞的分离和培养

dxy_ri21al48

请问现在分离成功了吗？方便写到这个回答里面吗？

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问求助b细胞培养

sswei

培养条件应该是在pma(5ng/ml)加5％t细胞上清液存在下用辐射的el4b5。

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问骨髓间充质干细胞培养

huarenqiang5

无需程序冻存，细胞可直接置于- 80°C冰箱完成冻存过程；无血清无蛋白配方，成分明确，不影响细胞的生长和分化潜能及其它高级应用；冻存步骤[1]1. 选择处于对数生长期的细胞，按照常用的方法收集细胞于离心管中，按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数（参考数量：5×105 至 5×106cells/mL）。2. 取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量，置于离心管中，离心收集培养细胞（考离心

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问如何进行T淋巴细胞体外培养法？

sswei

T淋巴细胞体外培养法T淋巴细胞转化试验（T细胞增殖试验）实验步骤1. 小鼠脾细胞悬液的制备取一个灭菌的平皿，加入5 ml Hank's液。颈椎脱臼法处死小鼠，取脾脏，放入平皿中，在钢网上研磨并过筛，制成细胞悬液。取出100 μl用于计数。将其余细胞悬液移入一离心管中，离心1500 rpm，7 min，（或1000 rpm，10 min）弃去上清，用RPMI1640 培养液稀释，制成2.5×10

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问细胞培养过程中碰到的小黑点,到底是什么啊，一直都有

丁香清香

在细胞培养中常可见到细胞及培养液中有一些大小不等、形态不同的黑色未知颗粒。有可能是细胞碎片或者污染如：支原体、真菌和寄生虫等

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问原代细胞培养贴壁性差如何改进？

sswei

大多数原代贴壁细胞贴壁时间是6h到12h，细胞不贴壁有好多种原因的：1、如果你用玻璃培养瓶培养的话，有可能你的瓶子没处理好；建议你用一次性培养瓶，进口的都可以。2、一般做原代细胞贴壁培养用胰酶消化，消化的程度要掌握好，如果消化时间不到、分散不均匀不贴壁。一般消化有热消化，就是放在37度里消化，时间比较短不好控制，传代培养常用。还有就是冷消化放在4度里，一般在几个小时以上，胰酶浓度也有要求的，一般都

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问我细胞传代不需要离心，只需要吹打成细胞悬液之后弃去部分液体，补加培养液就可以，操作很简单我步骤都是对的但是为什么我细胞状态一直？

Eason老歌迷

可能有几个原因，一个是你的传代时机选的不好，容易细胞老化。二是你的培养基缺少某些成分，或者是ph值不对。或者是你的胰酶消化过度。

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问肝癌细胞huh-7细胞培养有什么特别注意的嘛？一直养不好这个细胞，养着养着就黑了

bamboopiggy

这个细胞系，对血清的要求比较高，你用好点的血清养试试

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问T3代细胞传代，生长9天细胞突然变黄，显微镜下镜检全都是死细胞，为什么细胞突然死亡？

bamboopiggy

考虑细胞数目是否太多？养的时间太长，导致细胞太拥挤，然后变黄一般就是细胞多了。在除外细胞污染的情况下。

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问细胞来源，如何才能确定？各位前辈：本人预涉及胃癌细胞实验，手里有几株细胞，可不知细胞具体来源，不知如何查询？

bamboopiggy

MKN45 established from the poorly differentiated adenocarcinoma of the stomach (medullary type) of a 62-year-old woman MKN-1 (mutant P53)：Gastric adenosquamous carcinoma ，Derived from metastatic site:

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问关于细胞传代的问题?

bamboopiggy

六代，因为可传代数，指的是细胞总共可以传多少代，你可以在4代的时候，多冻点，每次复苏只能用6代。

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问细胞复苏后细胞状态不好有哪些原因？怎么解决？

麻黄连翘赤小豆

原因很多，冻存液的好坏，冻存细胞的状态，冻存的温度，复苏太慢等等首先你要按照不同细胞不同冻存条件冻存，有些冻存液需要梯度冻存，有些血清冻存会比较好。冻存尽量选增殖较快的时候消化下来冻存，冻存后不能反复冻融

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问那怎么样冻存细胞才能保证细胞能正常复苏，不至于冻存死亡呢？

麻黄连翘赤小豆

在冻存过程中减少冰晶的产生，这样细胞就不会刺破，根据这个目的进行冻存方法的改进。有些细胞是95血清5培养基，还有现成的冻存液都是可以用

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