如何进行T淋巴细胞体外培养法？

T淋巴细胞体外培养法T淋巴细胞转化试验（T细胞增殖试验）

实验步骤

1. 小鼠脾细胞悬液的制备

取一个灭菌的平皿，加入5 ml Hank's液。颈椎脱臼法处死小鼠，取脾脏，放入平皿中，在钢网上研磨并过筛，制成细胞悬液。取出100 μl用于计数。将其余细胞悬液移入一离心管中，离心1500 rpm，7 min，（或1000 rpm，10 min）弃去上清，用RPMI1640 培养液稀释，制成2.5×106 /ml的脾细胞悬液，然后加入ConA使每孔最终浓度为2 μg/ml，同时做不加ConA的阴性对照孔。

2. 将上述细胞悬液加入96孔平底培养板中，每孔0.1 ml。

3. 将培养板放入含有5 %CO2的37 ℃培养箱中培养48-72 小时，在培养结束前4-6 小时，于培养板各孔内加入1 mg/mlMTT液，10 μl/孔。37 ℃培养6 小时。

4. 各孔内加入0.01 M 盐酸—异丙醇110 μl，30 分钟内（或加2 %SDS100 ul/孔，过夜）用酶标测定仪测OD 值，测定波长570 nm。淋巴细胞与某种刺激物在体外培养时，细胞内DNA和蛋白质合成增加，出现一系列增生性变化：细胞变大，胞浆增多，出现空泡等。

以下是一般的T淋巴细胞体外培养方法：

首先从新鲜的外周血或淋巴组织中分离T淋巴细胞。可以使用密度梯度离心或磁珠分离等方法。

用RPMI 1640等适合T淋巴细胞培养的培养基配制培养液，加入10%的胎牛血清或其他适当的血清。此外，还应加入必需的氨基酸、维生素和其他营养物质。

将分离后的T淋巴细胞加入培养液中，密度应该控制在2×10^5-2×10^6 cells/mL范围内。

添加合适的激活剂，如PHA、Con A、IL-2等，以激活T淋巴细胞增殖和分化。激活剂的浓度可以根据实验需要进行调整。

将培养液和T淋巴细胞转移到培养皿中，通常使用96孔板、24孔板或25cm^2 培养瓶等。

通常在体外培养的过程中，需要定期更换培养液以保持营养物质的充足，通常每2-3天更换一次。

培养时间和条件可以根据实验需要进行调整，通常在体外培养3-7天。