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🔥 原代细胞培养实验

实验分类:

细胞实验

最新修订时间:

简介

由体内取出组织或细胞进行的首次培养,也叫初代培养

原理

原代细胞培养 是将机体内的某组织取出,分散成单细胞,在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制、以及细胞的衰老,死亡等生命现象。

应用

适于做细胞形态、功能和分化等研究。

来源:丁香实验

操作方法

🔥 小鼠原代肠胶质细胞分离培养

(1)新鲜分离的小鼠结肠组织置于无菌冰冷的 HBSS 溶液中清洗;(2)将 3~5 cm 结肠肠管套在玻璃棒上,精细镊小心剥离肠神经丛,置于无菌冰冷的 HBSS 溶液中;(3)4 ℃,356g,离心 30s,重复三次清洗组织;(4)将组织剪碎,置于加入BSA(0.3 mg/mL)和II型胶原酶(1.3 mg/mL)的预热 K-HS 溶液,37℃,消化 60 min;(5)4℃,356 g,离心 8

🔥 小鼠结肠固有层免疫细胞分离

(1)小鼠处死后迅速取出结肠,去除肠系膜,将结肠放置于含有冰冷PBS液的无菌培养皿中,沿肠系膜纵向剪开结肠,在PBS中剧烈摇晃,清洗结肠,去除肠腔内容物;(2)将结肠固定在黑色硅胶皿上,精细镊在体视显微镜下迅速分离黏膜层;(3)无菌剪刀将结肠黏膜组织剪成约 1 mm 的碎片,将剪碎的黏膜组织转移置于预热的装有不含钙镁的 HBSS(5% FBS和5 mM EDTA)溶液的无菌培养瓶中,37 ℃,25

🔥 小鼠骨髓来源巨噬细胞分离培养

巨噬细胞是目前免疫学研究中的热点细胞,它作为固有免疫的关键成分,在维持机体的稳态,疾病的预防和治疗等方面发挥至关重要的作用。这里以骨髓来源的巨噬细胞为例,以更加专业简洁的分离培养方法,为更好地研究巨噬细胞的生物学功能打下基础。

🔥 小鼠骨髓来源中性粒细胞的分离培养

相比于人类的中性细胞从外周血中大量获取,从血液中分离小鼠中性粒细胞则难度比较大。通过改善传统的腹腔注射巯基乙醇技术,应用 Histopaque 1077 和H istopaque 1119 的密度梯度离心可以获得满足实验要求的较高纯度中性粒细胞。

🔥 小鼠原代结肠上皮细胞分离培养

(1)C57BL/6 小鼠颈椎脱臼处死,喷适量酒精,滴加适量 Buffer 快速分离结肠;(2)沿肠系膜剪开,DMEM 培养基清洗去除肠腔内容物;(3)无菌剪刀将结肠组织剪成 1mm3 左右碎片;(4)10 mL 0.1% 胶原酶 I 和 3% 分散酶 II 消化组织,37℃,摇床消化 25 min;(5)吹打混匀,100 μm 细胞过滤器过滤,收集上清;(6)相差消化法、差速贴壁法去除成纤维细胞

组织块直接培养法(原代细胞培养实验)

1) 胚胎的分离。适用哺乳动物(仓鼠、小鼠和大鼠)2) 将 1-2 个胚胎转移至一个小的无菌培养皿中,用新的无菌剪刀小心地绞碎胚胎, 用 PBS 漂洗。3) 在无菌状态下,将绞碎的胚胎转移于一 50 ml 的无菌离心筒中, 加入 40 ml 0.25% 的无菌胰蛋白酶,用搅拌棒轻轻搅动 。4) 在温暖的环境中或置于 37 °C 培养箱中轻轻摇动 15 分钟。5) 让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降

培养细胞不贴壁怎么办?

原代细胞的培养一般需要在培养器皿中预包被一层促贴壁的物质,如 1 型鼠尾胶原,其对细胞及后续提取蛋白没有影响。

细胞生长不好/生长缓慢怎么办?

看细胞密度及是否污染。若细胞密度不够导致生长缓慢,需要增加细胞接种密度, 或将细胞从大皿转至小皿培养,或试着提高血清浓度;若细胞受轻度污染,则可多加点抗生素。

如何防止细胞污染?

首先,全程注意无菌操作;其次,所用器材高压灭菌,试剂若不是无菌则需要 0.22 μm 水系或有机系过滤器进行灭菌;最后,可在培养基中加入 1% 的双抗,防止污染。

BMDC 提取与培养需要注意的事项?

BMDC 的培养注意事项:1. 小鼠品系和性别:目前培养 BMDC 用的比较多的小鼠是雌性或雄性 C57BL/6 小鼠。2. 单独使用 GM-CSF 还是联合使用 IL-4?GM-CSF+IL-4 联合诱导的 BMDC 的成熟度高于 GM-CSF 单独诱导的 BMDC。3. 成熟诱导剂的选择:LPS 和 CD40L 均是 DC 体外完全成熟的强诱导剂,CD40L 诱导成熟的 BMDC 在体内显示出

原代细胞分离培养(小鼠结肠细胞为例)

(1)C57BL/6 小鼠颈椎脱臼处死,喷适量酒精,滴加适量 Buffer 快速分离结肠;(2)沿肠系膜剪开,DMEM 培养基清洗去除肠腔内容物;(3)无菌剪刀将结肠组织剪成 1mm3左右碎片;(4)10 mL 0.1% 胶原酶 I 和 3% 分散酶 II 消化组织,37℃,摇床消化 25 min;(5)吹打混匀,100 μm 细胞过滤器过滤,收集上清;(6)相差消化法、差速贴壁法去除成纤维细胞;

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