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小鼠骨髓来源巨噬细胞分离培养

相关实验:原代细胞培养实验

别名:Isolation and culture of mouse bone marrow-derived macrophages

最新修订时间:

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审核专家 | 黄玥琳博士

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简介

巨噬细胞是目前免疫学研究中的热点细胞,它作为固有免疫的关键成分,在维持机体的稳态,疾病的预防和治疗等方面发挥至关重要的作用。这里以骨髓来源的巨噬细胞为例,以更加专业简洁的分离培养方法,为更好地研究巨噬细胞的生物学功能打下基础。

材料与仪器

【试剂】1640 培养基、75% 酒精、9% 生理盐水、多聚赖氨酸包被液、红细胞裂解液、巨噬细胞集落刺激因子;

【耗材】无菌剪刀、无菌镊子、70 μm 细胞过滤器、细胞培养板;

步骤

(1)提前采用多聚赖氨酸包被实验所需细胞培养板;

(2)小鼠颈椎脱臼处死,然后放入 75% 酒精中浸泡 3-5 min 后,将小鼠转移到超净台上一个含有 PBS 皿上;迅速分离股骨和胫骨,尽可能多的去除附着的肌肉组织;

(3)9% 的生理盐水浸泡股骨和胫骨,剪去两端,暴露骨髓腔;

(4)生理盐水冲洗骨髓腔,70 μm 细胞过滤器过滤骨髓冲洗液;

(5)离心,室温 1200 rpm,5 min;

(6)弃掉上清,向离心管中加入红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer),用枪头反复吹打沉淀,使红细胞充分悬浮,红细胞裂解,在冰上静置 2 min,加入 1640 培养基,在室温 1000 rpm 离心 5 min 条件下离心,后弃掉上清;

(7)用含有 10 ng/mL 的巨噬细胞集落刺激因子的 1640 完全培养基重悬细胞沉淀,接种于 12 孔细胞培养板中;

(8)每隔两天换液一次,仍用含有巨噬细胞集落刺激因子的 1640 完全培养基;

(9)以此方法,培养直至第六天,细胞分化为成熟的巨噬细胞,可用于后续实验操作。

注意事项

(1)实验前所有器械消毒,高压灭菌,液体无菌过滤;

(2)生理盐水冲洗骨髓腔时,要冲至骨髓腔发白;

(3)用于后续培养需保证全称无菌操作;

(4)1640 完全培养基中加入巨噬细胞集落刺激因子,定向诱导分化。

来源:丁香实验

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