🔥 小鼠骨髓来源巨噬细胞分离培养

巨噬细胞是目前免疫学研究中的热点细胞，它作为固有免疫的关键成分，在维持机体的稳态，疾病的预防和治疗等方面发挥至关重要的作用。这里以骨髓来源的巨噬细胞为例，以更加专业简洁的分离培养方法，为更好地研究巨噬细胞的生物学功能打下基础。

【试剂】1640 培养基、75% 酒精、9% 生理盐水、多聚赖氨酸包被液、红细胞裂解液、巨噬细胞集落刺激因子；

【耗材】无菌剪刀、无菌镊子、70 μm 细胞过滤器、细胞培养板；

（1）提前采用多聚赖氨酸包被实验所需细胞培养板；

（2）小鼠颈椎脱臼处死，然后放入 75% 酒精中浸泡 3-5 min 后，将小鼠转移到超净台上一个含有 PBS 皿上；迅速分离股骨和胫骨，尽可能多的去除附着的肌肉组织；

（3）9% 的生理盐水浸泡股骨和胫骨，剪去两端，暴露骨髓腔；

（4）生理盐水冲洗骨髓腔，70 μm 细胞过滤器过滤骨髓冲洗液；

（5）离心，室温 1200 rpm，5 min；

（6）弃掉上清，向离心管中加入红细胞裂解液（ACK Lysis Buffer），用枪头反复吹打沉淀，使红细胞充分悬浮，红细胞裂解，在冰上静置 2 min，加入 1640 培养基，在室温 1000 rpm 离心 5 min 条件下离心，后弃掉上清；

（7）用含有 10 ng/mL 的巨噬细胞集落刺激因子的 1640 完全培养基重悬细胞沉淀，接种于 12 孔细胞培养板中；

（8）每隔两天换液一次，仍用含有巨噬细胞集落刺激因子的 1640 完全培养基；

（9）以此方法，培养直至第六天，细胞分化为成熟的巨噬细胞，可用于后续实验操作。

（1）实验前所有器械消毒，高压灭菌，液体无菌过滤；

（2）生理盐水冲洗骨髓腔时，要冲至骨髓腔发白；

（3）用于后续培养需保证全称无菌操作；

（4）1640 完全培养基中加入巨噬细胞集落刺激因子，定向诱导分化。