肿瘤细胞与CD8细胞共培养

在体外共培养CD8+T细胞和贴壁肿瘤细胞时，CD8+T细胞可能会贴壁并难以清除，这可能会干扰细胞增殖实验的结果。下面是一些可能有助于解决这个问题的建议：

1.在共培养之前，将肿瘤细胞先贴壁培养，使其形成单层的细胞，这样可以使CD8+T细胞与肿瘤细胞分开，减少CD8+T细胞贴壁的机会。

2.增加清洗步骤，使用温和的方法去除CD8+T细胞贴壁。可以使用低速离心（如200 xg，5分钟）来收集细胞，然后使用PBS缓冲液轻轻地重悬和离心多次，以去除贴壁细胞。

3可以考虑使用细胞分离试剂盒，这些试剂可以通过选择性地附着在贴壁细胞上来实现细胞分离。

4.可以使用细胞培养板上的分隔膜来分离CD8+T细胞和肿瘤细胞。这样可以将细胞分隔开来，以减少CD8+T细胞贴壁的机会。

针对CD8+ T细胞贴壁的问题，您可以考虑采用一些措施来减少它们贴壁的情况，例如：

使用细胞培养板前要充分预处理，包括用70％乙醇消毒板子，并让其彻底干燥，然后用完全含有无血清的培养基预先涂覆板子，以减少细胞与板子的直接接触。

您可以尝试使用抗体（如抗CD3和CD28）来激活CD8+ T细胞，以促进其在悬浮液中保持活性，而不是黏附在培养基底部。

您可以在共培养过程中将CD8+ T细胞和肿瘤细胞分开，以避免它们在培养基底部黏附。您可以使用一个隔膜，例如 Transwell 支架或直接将CD8+ T细胞培养在培养基上层，而肿瘤细胞则在下层，以使细胞之间相隔一定的距离。

可以采用比较温和的清洗方法来避免CD8+ T细胞的损伤，例如缓慢地冲洗培养基，或使用低速离心来除去细胞，而不是采用振荡器等搅拌方法。

另外，如果您需要进行cck8增殖实验，也可以考虑在进行实验前将CD8+ T细胞和肿瘤细胞分离，并单独培养，以避免黏附问题对实验结果的影响。

可以使用pbs进行吹洗冲洗，增加准确性。

清洗不干净只是一些残留的话影响不大的，毕竟要重复