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肿瘤细胞与CD8细胞共培养

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扮老虎吃猪耳朵

关于体外CD8+T细胞与肿瘤细胞共培养问题。最近即将准备做这个实验。肿瘤细胞是贴壁细胞细胞。目前有个问题、请教高人。

共培养时CD8细胞会贴壁,清洗不干净,而我要做cck8增殖实验,这样就会对OD值影响很大

请问有什么比较好的解决办法吗?

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4 个回答

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龙大人驾到

有帮助

在体外共培养CD8+T细胞和贴壁肿瘤细胞时,CD8+T细胞可能会贴壁并难以清除,这可能会干扰细胞增殖实验的结果。下面是一些可能有助于解决这个问题的建议:

1.在共培养之前,将肿瘤细胞先贴壁培养,使其形成单层的细胞,这样可以使CD8+T细胞与肿瘤细胞分开,减少CD8+T细胞贴壁的机会。

2.增加清洗步骤,使用温和的方法去除CD8+T细胞贴壁。可以使用低速离心(如200 xg,5分钟)来收集细胞,然后使用PBS缓冲液轻轻地重悬和离心多次,以去除贴壁细胞。

3可以考虑使用细胞分离试剂盒,这些试剂可以通过选择性地附着在贴壁细胞上来实现细胞分离。

4.可以使用细胞培养板上的分隔膜来分离CD8+T细胞和肿瘤细胞。这样可以将细胞分隔开来,以减少CD8+T细胞贴壁的机会。

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loveliufudan

有帮助

针对CD8+ T细胞贴壁的问题,您可以考虑采用一些措施来减少它们贴壁的情况,例如:

使用细胞培养板前要充分预处理,包括用70%乙醇消毒板子,并让其彻底干燥,然后用完全含有无血清的培养基预先涂覆板子,以减少细胞与板子的直接接触。

您可以尝试使用抗体(如抗CD3和CD28)来激活CD8+ T细胞,以促进其在悬浮液中保持活性,而不是黏附在培养基底部。

您可以在共培养过程中将CD8+ T细胞和肿瘤细胞分开,以避免它们在培养基底部黏附。您可以使用一个隔膜,例如 Transwell 支架或直接将CD8+ T细胞培养在培养基上层,而肿瘤细胞则在下层,以使细胞之间相隔一定的距离。

可以采用比较温和的清洗方法来避免CD8+ T细胞的损伤,例如缓慢地冲洗培养基,或使用低速离心来除去细胞,而不是采用振荡器等搅拌方法。

另外,如果您需要进行cck8增殖实验,也可以考虑在进行实验前将CD8+ T细胞和肿瘤细胞分离,并单独培养,以避免黏附问题对实验结果的影响。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

可以使用pbs进行吹洗冲洗,增加准确性。

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秋秋欣欣

有帮助

清洗不干净只是一些残留的话影响不大的,毕竟要重复

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