细胞复苏后细胞状态不好有哪些原因？怎么解决？

细胞有污染，细胞老化（传代次数太多），冻存步骤不合理。养一段时间如果还是不好就直接弃了吧

原因很多，冻存液的好坏，冻存细胞的状态，冻存的温度，复苏太慢等等

首先你要按照不同细胞不同冻存条件冻存，有些冻存液需要梯度冻存，有些血清冻存会比较好。冻存尽量选增殖较快的时候消化下来冻存，冻存后不能反复冻融

1.可能细胞的冻存和溶解过程有问题。2孔板有问题。3培养基的问题

细胞数太少，健康生长需要细胞间的连接，冻存时细胞浓度低于1-undefined105个/ML，复苏很难成功的。解决：细胞计数，离心后调整细胞浓度。记得不要重新洗细胞，刚复苏的细胞比较脆弱。

1、冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，但我因为这个问题就两种肺癌细胞和一种肝癌细胞专门做过试验，这个绝对是绝大部分人细胞复不活的一个原因。太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。

2、冻存液好不好，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。

3、冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过7%，大于5%，太多也不好。

4、在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。

5、冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。

6、如果细胞污染，是否能很快看到。从这个角度讲建议去除离心这步。

7、细胞在冻存前是否过密。