杂交瘤细胞复苏失败原因

最近，我把杂交瘤细胞复苏了，可是做了三次都死掉了。同期复苏的SP2/0却能活。

1，我的细胞是在-76保存，放了半年，

2，-76的冰箱温度有波动，经常打开门，

3，细胞复苏后大量死亡，但是也有很少的比较圆的透亮的活细胞，

4，细胞不贴壁，第二天就就死了，

5，复苏的过程正常，37度速解冻。

请高手帮忙分析一下，或者遇到相同问题的朋友分析交流一下。

丁香园网友haha63认为：没按规定保存在液氮所致！细胞切记不要保存在－80度冰箱内。哪怕短暂保存在－80也会对细胞有伤害。

丁香园网友yusi100认为：我认为是放在-80度冰箱里造成的，你的冰箱又总是开门，而且冻存细胞时放在-80度冰箱最好不要超过一个月。

你也可以把解冻温度调到40度，这样解冻速度快，对细胞的损伤会减少。我们实验室解冻时都是用40度，而且复苏后的细胞成活率很高，基本没有死细胞，状态也很好，然后把血清浓度调高些，培养基不要加多会增加悬浮力，细胞不好贴壁，可以再试着复苏一次 。

丁香园网友wangjingwen认为：你的保存温度不够低，保存时间又太长。建议保存3个月以上的用液氮 。