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杂交瘤细胞的保存与复苏

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杂交瘤细胞的保存与复苏
目前冻存细胞均采用-196℃液氮保存,以保持其特性和活性。
1、杂交瘤细胞的冻存 收集培养的杂交瘤细胞或从小鼠体内取出的杂交瘤细胞,加入一定量的细胞冻存液(30~40%小牛血清,50~60%不完全RPMI-1640培养液,10%DMSO),使细胞浓度为1~5×106 个/ml。将细胞悬液分装到1ml冻存管中,先置于-20℃冰箱1h,再移置-80℃冰箱,最后置液氮内,以5cm/5min速度下降,直至没入液氮。
杂交瘤细胞可在-80℃低温冰箱存活6~9个月,在-150℃深低温冰箱或-196℃液氮中存活数年。
在诱生腹水时取离心沉淀的细胞,按上述方法冻存。这种直接冻存的杂交瘤细胞比经体外传代培养细胞的活性还高,且简便易行。
2、杂交瘤细胞的复苏培养
将杂交瘤细胞冷冻管从液氮中取出,立即投入38℃~42℃水浴中,待细胞悬液快速解冻后,将细胞用RPMI-1640液清洗两次,然后将细胞用完全RPMI-1640培养液配成细胞悬液滴入24孔培养板孔中或25ml培养瓶内。置37℃ 5%CO2 温箱培养。待复苏细胞生长良好时,2~3d传代培养。若冷冻后死亡细胞较多,可采用在培养板或培养瓶中加饲养细胞。在复苏冷冻细胞前一天,于24孔培养板每孔中加小鼠腹腔巨噬细胞104 /ml,0.5ml。
亦可采用小鼠体内复苏法,即将复苏的细胞直接注入BALB/c小鼠皮下或腹腔(1周前注射降植烷)。
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