原理
冻存细胞应在流水中快速融化并加入生长培养液。实验者应配戴护目镜和手套，因为曾浸没在液氮中的冻存管中可能漏人液氮，而当融化冻存液时冻存管中的气体温度上升可导致爆炸。
材料与仪器
冻存细胞
乙醇 细胞培养液
冻存管、水浴锅
乙醇 细胞培养液
冻存管、水浴锅
步骤
1) 调整水龙头温度为 40°C，在龙头下放置一广口烧杯。
2) 从液氮中取出冻存细胞的冻存管。
3) 将冻存管置于 40°C 流水中直至完全融化，一旦冰块消失即将冻存管从水浴中取出。
该步骤的目的是尽可能快地融化细胞，但不允许细胞温度升到 37°C 以上而且一旦其融化细胞便不应再保存在冻存液中。
4) 用 70% 乙醇擦洗冻存管外部以降低污染机会。
5) 吸取冻存管内容物于 T-25 细胞培养瓶或培养皿中，缓慢加人 4 ml 生长培养液，并混匀。
6)37°C 孵育细胞，在 24 小时内更换培养液以滋养细胞。
2) 从液氮中取出冻存细胞的冻存管。
3) 将冻存管置于 40°C 流水中直至完全融化，一旦冰块消失即将冻存管从水浴中取出。
该步骤的目的是尽可能快地融化细胞，但不允许细胞温度升到 37°C 以上而且一旦其融化细胞便不应再保存在冻存液中。
4) 用 70% 乙醇擦洗冻存管外部以降低污染机会。
5) 吸取冻存管内容物于 T-25 细胞培养瓶或培养皿中，缓慢加人 4 ml 生长培养液，并混匀。
6)37°C 孵育细胞，在 24 小时内更换培养液以滋养细胞。
注意事项
• 某些类型细胞呈现较好的复苏效果，如果缓慢加入培养液于冻存液中以使冻存液被去除，然后细胞离心后重悬于新鲜培养液中。
• 冻存记录：保存冻存细胞的精确记录是很重要的。需建立细胞生长史、名称、传代次数、冻存日期、复苏次数、生长培养液和在冻存器中的位置都是应记录的项目。
• 冻存液：应用补充 10%~20%FBS 的生长培养液和 10% 甘油或 DMSO。大多数悬浮细胞釆用 DMSO。最佳冻存液配方在比较 FBS 浓度（10%~20%)，DMSO(5%~20%) 或甘油（10%~15%) 浓度后决定。在低温状态保存数天后进行复苏效率的比较。
小心：甘油；DMSO
• 冻存记录：保存冻存细胞的精确记录是很重要的。需建立细胞生长史、名称、传代次数、冻存日期、复苏次数、生长培养液和在冻存器中的位置都是应记录的项目。
• 冻存液：应用补充 10%~20%FBS 的生长培养液和 10% 甘油或 DMSO。大多数悬浮细胞釆用 DMSO。最佳冻存液配方在比较 FBS 浓度（10%~20%)，DMSO(5%~20%) 或甘油（10%~15%) 浓度后决定。在低温状态保存数天后进行复苏效率的比较。
小心：甘油；DMSO
常见问题
将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存。
来源《细胞实验指南（上册)》作者：黄培堂。
来源《细胞实验指南（上册)》作者：黄培堂。
来源：丁香实验
