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HEK293细胞或CHO-K1细胞在摇瓶培养

相关实验:冻存细胞的复苏

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梁工1315

. HEK293细胞或CHO-K1细胞在摇瓶培养时,肉眼观察不到结团,但是在细胞计数仪上会观察到细胞有几个黏连,似葡萄状相连的现象。请问如何进行处理解决?

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4 个回答

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Eason老歌迷

有帮助

第一,换液时动作要轻。第二,293细胞在低代时容易贴壁,生长良好,在传到几十代以后,易聚集成团,且贴壁不牢,用PBS冲洗时即可能脱落,即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液。第三,刚复苏的293贴壁很慢,复苏接种后24小时内,应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行首次更换培养基比较合适。

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bamboopiggy

有帮助

尝试用枪吹散,如果不多也可以不用管它

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天一湖医者

有帮助
如果细胞抱团不影响生长就没问题,只是计数时较麻烦。在消化时,可在细胞由多角形变成圆型之前,用手轻磕细胞培养瓶的侧壁,使细胞从壁上脱落(最好不要吹打,对细胞形状和生长都不好)。
如果感觉有死细胞的 DNA,在细胞悬液中加入几滴无菌的 DNAse(1mg/ml 溶于水)将 DNA 链打断。轻柔地吹打细胞,防止对细胞膜造成物理损伤。
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未来9

有帮助

可能是消化过渡引起细胞损伤,释放引起聚团的组物质。

可以试试以下操作;

1、消化得时候尽量温和些;

2、细胞离心速度不宜过大或时间过长;

3、传代得时候保证吹打均匀。

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