为什么细胞解冻后缺少活力，活细胞占比较低？

慢冻速溶，液氮保存，如果达不到前面的条件，细胞存活率就会降低

可能的原因有1.冻存方法不合适，包括冻存条件和冻存液；2.冻存后长时间未复苏；3.解冻方法不合适。4.细胞本身原因。

这种现象可能主要由以下几种原因所导致：培养物冻存液不行，冻存方法不当 和解冻没弄好

这种现象可能主要由以下几种原因所导致：

1.培养物冻存液等质量欠缺。

解决方案：

a.确保用来制备储存物（冻存液）的起始培养物需要保证其健康、无微生物污染、处于生长对数期后期状态。

b.收获细胞时需要小心翼翼，避免细胞损伤。

2.储存物冻存方法不当

解决方案：

a.在液氮冷冻细胞时，确保细胞、培养基和其他试剂的浓度，以及冻存实验步骤依照供应商的建议。一般来说，冻存应该缓慢，大约1-3° C/min以减少冰晶形成。

b.使用电子可编程或机械冷冻装置以确保一致的、适当速率的冷冻。

c.选择最合适的细胞冷冻保护剂。如果使用甘油，不要将其存储在光照下，因为曝光会使甘油转化为有对细胞毒性的丙烯醛。

3.储存物保存不当

解决方案：

a.储存物应时刻保持在-130℃，理想情况是置于液氮中，以确保较大的细胞活性。

b.如果将细胞直接浸入液氮中，容易造成液氮泄露到冻存管内，解冻时会有冻存管爆炸的风险。所以一般储存在液氮上方的气相环境中。

4.细胞解冻方法不当

解决方案：

a.一般来说，细胞应该快速解冻、使用预热的培养基、尽快移除含有冷冻保护剂的培养基防止细胞活力下降。

b.确保小心操作细胞。不要涡旋或高速离心，因为低温保存后的特别容易受到损伤。