准备养原代脂肪细胞，请问在培养，传代，铺板及诱导分化原代脂肪细胞有什么需要注意和小心的点，应该采取哪些措施防止，谢谢！

传代培养的注意事项

1）离体培养的细胞生命力比较脆弱，因此传代时细胞没有生长到培养瓶底壁面积的 80%以前，不要急于传代。

2）首次传代，由于原代培养中各种类型的细胞常混杂生长，传代时不同细胞又不同的消化时间，因而要根据需要注意及时处理。

3）对贴壁细胞消化后的吹打过程要有序进行，要从一边开始到另一边结束，尤其是器皿的四角处， 确保瓶皿底壁各处的细胞都被吹打脱离。 吹打时动作不宜过猛， 吹出液体的力度要适中，否则会直接损伤细胞并产生能伤害细胞的气泡。

4）对于贴壁能力较弱，容易脱壁的细胞，可以不经蛋白酶原消化处理和终止消化这两步，直接对原代培养物或经漂洗后用吸管进行吹打使细胞脱离瓶皿底壁。 这种直接吹大的方法对生命力旺盛的细胞如某些肿瘤细胞较为合适。 高强度机械吹打易对细胞造成伤害较大， 细胞也常有较大数量的丢失， 因而绝大部分贴壁生长的细胞需消化后才能吹打， 一般不单独采用高强度机械吹打。

5）首次传代时适当增大接种的细胞密度，使培养的细胞间尽快发生相互作用，有利于传代细胞的存活。

6）传代数是指对培养物传代的次数，它不等于细胞分裂的次数或细胞的代数，而仅代表传代操作的次数。

7）传代对细胞的影响或伤害程度仅次于将活细胞从生物体内取出并进行原代培养的程度。只是因为传代后的细胞生长并不像刚开始原代培养时那样缓慢罢了。

8）每经过一次传代，细胞的生长环境就相应发生一次较大变化。体外生长的细胞若处于动荡的生活环境中， 细胞的遗传特性往往容易发生改变。 经过多次传代培养的细胞， 往往容易转化为恶性细胞。 因此， 传代对细胞生长和性状会产生不利影响， 一般情况下要尽可能减少传代次数。

建议以下几点措施进行防范:

1.原代细胞培养前需进行消毒处理，保证培养环境的无菌状态；

2. 原代细胞培养需要使用无菌器具，包括培养皿、离心管、移液器等；

3. 培养液的配制需精确，避免出现过高或过低的浓度，影响细胞的生长；

4. 原代细胞培养需要注意细胞的密度，不宜过于密集或过于稀疏，否则会影响细胞的形态和生长状态；

5. 培养液的更换需要掌握好时机，避免细胞受到过度刺激而死亡；

养原代脂肪细胞需要注意以下几个方面，以确保细胞的健康和良好的实验结果：

1. 培养条件：使用无菌技术操作，确保培养环境无微生物污染。维持适宜的温度、湿度和气体含量。

2. 培养基选择：选择适合脂肪细胞生长和分化的培养基，并添加必要的营养物质和生长因子。

3. 传代技术：传代时要避免细胞过度纳氯化物应使用缓慢而温和的细胞解聚方法。注意传代次数的控制，避免细胞老化。

4. 铺板和细胞密度：确保铺板前的培养皿和工具消毒干净。在铺板时，注意控制细胞密度，以避免过度或过稀的细胞层。

5. 分化诱导：使用合适的诱导剂和培养条件来引导脂肪细胞分化。注意诱导剂的浓度和处理时间，以确保有效的分化。

为了防止污染和确保细胞的纯度和健康状态，你可以采取以下措施：

1. 无菌操作：在实验室中维持严格的无菌操作规范，包括使用无菌培养器具、操作台和试剂。

2. 细胞检测：定期检测细胞的纯度和健康状态，可以通过细胞形态观察、细胞计数和细胞活力检测等方法。

3. 消毒和清洁：保持实验室环境的清洁和消毒，定期清洁培养箱、孵化器等设备，并更换培养基和培养皿。

4. 防止交叉污染：避免不同细胞系之间的交叉污染，使用不同的培养器具和操作区域来处理不同的细胞。