原代培养人前脂肪细胞

材料与试剂：

镊子、剪子、培养皿

离心管、培养瓶、吸管、滴管

200目筛网

胶原酶（10ml）（20mg胶原酶、200mg牛血清白蛋白、10毫升双蒸水）国外也用培养基配.

方法：

1、取无菌条件下新鲜切除的人腹部皮下脂肪组织约5－10克，放入培养皿，用1×PBS冲洗2－3次，充分洗去血污，剔除结缔组织和可见血管。

2、充分剪碎脂肪组织为1mm×1mm的小块。

3、将其加入到含有5毫升胶原酶的离心管里，37度水浴振荡消化1小时。

4、将含有组织的消化液加入到有10毫升DMEM/F12培养基的离心管中，并且使用吸管反复吹打使组织块分散，然后通过孔径25μM（200目）的筛网过滤，收集滤液和未过滤的组织块。

5、将滤液以600g离心5分钟弃上清，加入原代培养的基础培养基制成细胞悬液。

6、将未滤过的组织按照上述过程再处理一次，将俩次获得的细胞悬液混匀计数，按照104个/cm2的密度接种于培养瓶里，于37度，5％CO2培养箱中培养。

接种12－16小时基本贴壁。在增殖状态下的前脂肪细胞可以使用胰蛋白酶消化的方法传代，并且可以冻存和复苏。