NS0细胞培养

如果NSO细胞系一直无法培养成功，可能需要检查以下几个方面：

1. 培养条件是否正确：包括温度、CO2浓度、培养液配方和pH值等。确保所有条件都符合NSO细胞系的生长要求。

2. 细胞培养技术：NSO细胞系很敏感，需要专业的细胞培养技术，包括细胞解冻、传代、分离、传染等等。确保操作过程中无菌且温和。

3. 起始细胞质量：NSO细胞系对起始细胞的质量要求比较高，起始细胞应该是健康的、纯度高的。

4. 检测污染：NSO细胞容易受到细菌、真菌、病毒等污染物的影响，因此需要做好细胞培养环境的无菌控制，并进行定期的污染检测。

如果以上方面都已经排查完毕，还是无法成功培养NSO细胞系，可以尝试使用其它培养基、搭配其它细胞系，或者考虑换用其它细胞系来进行实验。

这个细胞养起来比较费时间，严格无菌操作，慢慢等吧

这个细胞不好养，建议添加血清及大量的胆固醇，有利于细胞生长

NSO细胞是一种非常重要的哺乳动物细胞系，被广泛用于生物制药领域。在细胞培养的过程中，养护NSO细胞需要注意以下几点：

培养基的选择：NSO细胞的培养基通常采用DMEM/F12和RPMI-1640混合，加入10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素。此外，可以根据需要加入其他营养物质和生长因子。

培养条件的调整：NSO细胞的生长需要温度在37℃左右，同时要保持培养箱内的CO2浓度在5%左右。需要定期更换培养基，一般为2-3天一次，避免细胞因营养不足或污染而死亡。

细胞密度的控制：NSO细胞的密度应该控制在一定范围内，一般为5×10^4~1×10^6个/mL，避免过度密集造成细胞凋亡或停滞生长。

消毒措施：培养细胞需要严格消毒操作，避免污染的产生。使用无菌技术进行操作，保持培养器具的清洁，同时定期更换培养箱内的过滤器和消毒。

冻存和复苏：NSO细胞需要定期冻存备份，并在需要时进行复苏。在冻存和复苏的过程中，需要注意培养基的配方和温度的控制，避免细胞因温度变化而死亡。

细胞培养:

一．贴壁细胞

应用细胞株，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。

肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。

显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。

严格无菌操作，打开细胞培养瓶。HEC-1-B-RFP荧光标记细胞株

将细胞培养瓶内的培养基用吸管吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05~undefined-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。

1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2 培养。

二．悬浮细胞

1. 应用细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。

2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。

3. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管吸出（严禁直接倾倒）。

5. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2 培养。

三．一毫升小管操作方法 小管内也是此细胞。

1. 用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）。

2. 严格无菌操作，用吸管吸出管中细胞至9mundefined培养基混匀。

3. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。

4.换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO7 培养。