细胞培养大全

1. 准备下列试剂和材料： 培养悬液中的单一胚胎样体 6 孔组织培养板 带棉塞巴斯德吸管 明胶包被的玻璃盖玻片 无菌镊子 ES 分化培养基 2. 准备明胶包被的玻璃盖玻片 3. 用无菌镊子在 6 孔组织培养板的每孔中放一块明胶包被的玻璃盖玻片。 4. 在生物安全柜中取下培养板的盖，紫外线下照射 3~5 分钟，杀死可能污染的细菌。 5. 用带棉塞巴斯德吸管把含有一个单一胚胎样体的

神经细胞的原代培养是尽 量 创造最适合于各类神经细胞生长的体外环境，获得状态良好，纯度较高细胞的方法 。 脑部组织来源的各种神经细胞的培养具有相似的取材过程和部分通用的培养条件。

人肾小管上皮细胞 HK-2 属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入 HPV-16 E6/E7 基因而获得永生化。

根据人们的经验，肿瘤细胞在体外不易培养，建立能传代的肿瘤细胞系更为困难。 当肿瘤组织或细胞初代接种培养后，常出现以下几种情况： 1. 完全无细胞游出或移动； 2. 有细胞移动和游出，但无细胞增殖，细胞长时间处于停滞状态以致难以传代； 3. 有细胞增殖，传若干代后停止生长或衰退死亡； 4. 传数代后细胞增殖缓慢，经过一段停滞期后，才又呈旺盛生长状态，形成稳定生长的肿瘤

三维（3D）细胞培养是指将具有三维结构不同材料的载体与各种不同种类的细胞在体外共同培养，使细胞能够在载体的三维立体空间结构中迁移、生长，构成三维的细胞和载体复合物。根据培养方式不同可分为静止三维细胞培养和动态三维细胞培养，常用三维细胞培养模式包括：基质覆盖培养、旋转烧瓶培养、微载体培养、预置支架培养以及旋转细胞培养系统等，其主要技术路线是：首先对细胞进行常规二维培养，待细胞长满单层后，用胰蛋白酶消

体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验采取长时间药物处理、诱导抗性，最终筛选出具有一定抗性的细胞克隆。

细胞辐照指的是用 X 射线，B、y 射线等电离射线来辐射细胞的过程。

毛细血管内皮细胞在形态上与心血管系统其它部位内皮细胞相似，但实验证明，在生物学性状上却大不相同，不能相互代替，因此必须单独进行培养。毛细血管细小，结构简单，内皮细胞外有较多的结缔组织，进行分离培养有很大困难。近年毛细血管培养已获成功；材料取自血管丰富组织，利用人的小儿包皮、人脾脏、牛肾上腺、癌组织（如卵巢癌）等均可。

将角膜组织置于胶原蛋白上，使其附着。然后，在涂有纤连蛋白和胶原蛋白的培养皿扩增培养。

人子宫内膜是一个高度再生的组织，这种巨大的再生能力被认为与人类子宫内膜干细胞有直接关系。子宫内膜干细胞分类较为多样化，包括子宫内膜细胞侧群（side population，SP）、子宫内膜间充质干细胞、月经血来源的干细胞等。子宫内膜间充质干细胞（enMSCs）是一类具有自我更新能力、分化潜力、低免疫原性、低致瘤性等生物学特性的新型成体干细胞。

利于皮肤表皮细胞培养成功的因素有，在有胶原的底物上易生长；另有人发现把人或小鼠表皮细胞培养在以3T3 细胞为饲养层（用射线照射后）上时，细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低pH、Ca2+的含量和温度等，均利于表皮细胞生长。向培养基中加氢化可的松（ 10 μg/ml ）、10-10 的霍乱毒素、10M-6 的异丙基肾上腺素（Isopro-terenol）和10 ng/mI 促表皮生长因子（EG

培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代；部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代；悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打传代。

由于甲状腺富含纤维性组织，所以甲状腺的消化分离一般采用胶原酶与胰蛋白酶联合消化法，用单一的胰蛋白酶消化效果一般；促甲状腺激素(TSH)是培养甲状腺细胞必备的，它能够起到促进甲状腺细胞生长的作用。

淋巴样细胞通常呈悬浮状生长。常用的培养液为含 10%~15%FBS 的 RPMI1640 各种细胞系间最佳接种密度和平台期细胞密度各不相同。当培养一种新的细胞系时其最佳原则为按 1:2 和 1:4 的比例传代细胞，在 3~4 天时间内进行细胞计数以计算每毫升细胞数。细胞在传代后 24~36 小时细胞数会翻倍。传代细胞密度太低，细胞容易死亡，反映出细胞在达到增长前有较长滞留期。一旦细胞适应实验室的培

作为高度分化的多核巨细胞，破骨细胞主要来源于单核/巨噬细胞造血干细胞系，是一种具有骨吸收功能的细胞，目前研究破骨细胞分化的经典细胞系包括小鼠 RAW264.7 单核巨噬细胞系与小鼠原代 BMMs 细胞系。其中 RAW264.7 细胞是 Abelson 鼠白血病病毒诱导 BALB/c 小鼠肿瘤生成后，收集小鼠腹水中单核样巨噬细胞得到的细胞株，被广泛应用于细胞生物学和免疫学研究中。RAW264.7 细

表皮细胞的培养实验是指在体外条件下表皮细胞的培养。

肿瘤组织及细胞在模拟体内生长环境的条件下、与一般组织细胞一样、也能够生长发育乃至繁殖、为研究癌变机理、抗癌药检测、肿瘤分子生物学提供大量的实验材料。

取小鼠腹腔巨噬细胞与乳胶颗粒在不同培养条件下混合后定量加入24孔板，37 ℃，5% CO2培养箱中孵育后，荧光显微镜下计数吞噬百分率和吞噬指数。

1. 将含有冻存细胞的安瓿放入 37℃ 水浴中解冻。2. 用 70% 乙醇对安瓿的顶端进行消毒，打开安瓿，用吸管将细胞转移到含有 5 ml 起始培养基的 25 cm2 组织培养瓶中，轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布于培养瓶中，将其放入 5% CO2 加湿培养箱中 37℃ 培养过夜。3. 吸出起始培养基，换成适当的维持培养基。将细胞放回 CO2 培养箱 37℃ 培养，每天检查细胞是否生长至汇片。4.

由于神经干细胞(Neural Stem Cell)具有自我更新和多向分化的潜能，因此，可以采用悬浮神经球培养的方法来获得和研究。即将胚胎脑组织处理成单个细胞后，只有具有自我更新能力的细胞才能在培养液中克隆增殖成为悬浮的神经球，并随着传代的进行，保持增殖能力和向多种神经子代细胞分化的能力。