材料与仪器
单一胚胎样体
组织培养板 巴斯德吸管 玻璃盖玻片 无菌镊子 ES 分化培养基
组织培养板 巴斯德吸管 玻璃盖玻片 无菌镊子 ES 分化培养基
步骤
1. 准备下列试剂和材料:
培养悬液中的单一胚胎样体
6 孔组织培养板
带棉塞巴斯德吸管
明胶包被的玻璃盖玻片
无菌镊子
ES 分化培养基
2. 准备明胶包被的玻璃盖玻片
3. 用无菌镊子在 6 孔组织培养板的每孔中放一块明胶包被的玻璃盖玻片。
4. 在生物安全柜中取下培养板的盖,紫外线下照射 3~5 分钟,杀死可能污染的细菌。
5. 用带棉塞巴斯德吸管把含有一个单一胚胎样体的一小滴 ES 细胞悬液转移到盖玻片中心。
6. 孵育 4~5 小时,使单一胚胎样体附着于明胶表面。保持培养物湿润。
7. 吸附后,每孔中缓慢加入 2 ml 分化培养基(预热至 37℃)。注意不要冲掉细胞。
8. 培养基变黄后换液,至少每周一次,加 2 ml 分化培养基。
9. 7 天内可观察到心肌细胞的自动收缩。
培养悬液中的单一胚胎样体
6 孔组织培养板
带棉塞巴斯德吸管
明胶包被的玻璃盖玻片
无菌镊子
ES 分化培养基
2. 准备明胶包被的玻璃盖玻片
3. 用无菌镊子在 6 孔组织培养板的每孔中放一块明胶包被的玻璃盖玻片。
4. 在生物安全柜中取下培养板的盖,紫外线下照射 3~5 分钟,杀死可能污染的细菌。
5. 用带棉塞巴斯德吸管把含有一个单一胚胎样体的一小滴 ES 细胞悬液转移到盖玻片中心。
6. 孵育 4~5 小时,使单一胚胎样体附着于明胶表面。保持培养物湿润。
7. 吸附后,每孔中缓慢加入 2 ml 分化培养基(预热至 37℃)。注意不要冲掉细胞。
8. 培养基变黄后换液,至少每周一次,加 2 ml 分化培养基。
9. 7 天内可观察到心肌细胞的自动收缩。
来源:丁香实验