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ES 细胞分化培养实验

实验分类:

细胞实验

最新修订时间:

简介

本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

来源:丁香实验

操作方法

悬滴培养

1. 准备下列试剂和材料: 未分化 ES 细胞 无 Ca2+ 和 Mg2+ PBS ES 分化培养基 8 道微量移液器 无菌多道移液器容器 2. 收获未分化 ES 细胞。 3. 在 100 mm 组织培养皿中加 10 ml PBS 备用。 4. 在一无菌容器内将 5X104 未分化 ES 细胞悬浮于 5 ml ES 分化培养基中。 5. 用多道移液器在 100 mm 组织培养皿盖

培养皿ES细胞集落

1. 准备下列试剂和材料: 悬滴培养的 ES 细胞单一胚胎样体 100 mm 细菌培养皿 ES 分化培养基 2. 在 100 mm 细菌培养皿中加 10 ml 预热的分化培养基。 3. 从温箱中取出培养 2 天的悬滴培养物。小心翻转培养皿的盖,用 10 ml 吸管收集内表面上的悬滴。 4. ES 细胞集落转移到培养皿中。 5. 单一胚胎样体孵育 3 天。

附着 ES 细胞分化培养

1、准备明胶包被的玻璃盖玻片2、用无菌镊子在 6 孔组织培养板的每孔中放一块明胶包被的玻璃盖玻片。3、在生物安全柜中取下培养板的盖,紫外线下照射 3~5 分钟,杀死可能污染的细菌。4、用带棉塞巴斯德吸管把含有一个单一胚胎样体的一小滴 ES 细胞悬液转移到盖玻片中心。5、孵育 4~5 小时,使单一胚胎样体附着于明胶表面。保持培养物湿润。6、吸附后,每孔中缓慢加入 2 ml 分化培养基(预热至 37℃

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