细胞培养技术（体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验）

体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验采取长时间药物处理、诱导抗性，最终筛选出具有一定抗性的细胞克隆。

小鼠、小牛血清、DMEM、DOX；
CO₂培养箱、无菌钢圈；

一、培养条件

用含 10% 小牛血清的 DMEM 培养液，5% CO₂，37℃ 培养。

二、实验步骤

1、将 CHO 细胞培养在含 10% 血清的 DMEM 培养液中，先用 DOX（阿霉素）0.01 ug/ml 诱导培养 CHO 细胞 3 个月。

2、然后在 3 个月内逐步增倍 DOX 的浓度达 0.1 ul/ml，接着进行 DOX 低浓度的筛选。

3、随后用无菌钢圈套取抗性倍数较高的克隆 RC₁ 作 CHO 和 RC₁ 对 DOX 的剂量-反应曲线，求 CHO 和 RC₁ 的 IC₅₀ 值。

4、抗性倍数即为 RC₁ 的 IC₅₀ 与 CHO 的 IC_50。

1. 要具备培养细胞的实验室条件，谨防污染。

2. 通过实验计算出敏感细胞对该药物的 IC₅₀ 值，以确定其实诱导浓度。

3. 采用长期增量的培养法可产生稳定的抗药性细胞株，对阿霉素等产生抗性的细胞株，往往对其他天然来源的抗肿瘤药亦可产生抗药性。